Interacción de las P-ATPasas con el citoesqueleto

MARIANELA DALGHI, MARIELA FERREIRA GOMES, CANDELARIA DE LA FUENTE, IRENE MANGIALAVORI, LAURA VANAGAS, ROLANDO ROSSI Y JUAN PABLO F.C. ROSSI

La Plata-Buenos Aires-Argentina

Congreso; XXXVII. Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica (SAB); 2008

Sociedad Argentina de Biofísica

El objetivo de este trabajo fue obtener información estructural sobre los cambios conformacionales de la región transmembrana de la bomba de calcio de membrana plasmática (PMCA) y compararla con la bomba de calcio de retículo sarcoplásmico (SERCA) cuya estructura cristalina es conocida. Para ello, medimos la marcación de preparaciones micelares de la PMCA y SERCA en diferentes condiciones experimentales, con un análogo de fosfatidilcolina, [125I]TID-PC/16, una sonda utilizada por nosotros para cuantificar los lípidos de la región transmembrana [1] [2]. Los resultados muestran que: (1) La marcación con [125I]TID-PC/16 en SERCA decrece un 25% en presencia de Ca2+; (2) Cuando comparamos las estructuras cristalográficas 2ear (E2) [3] y 1su4 (E1Ca) [4], observamos que la disminución en la marcación se corresponde cualitativamente con la superficie expuesta al solvente de la región transmembrana; (3) La presencia de Ca2+ y calmodulina disminuye la marcación de la PMCA en una proporción similar, mientras que la incubación con Ca2+ sólo, la incrementa hasta un 155%. Nuestros resultados sugieren que la conformación en la que la enzima se encuentra totalmente activa ?con Ca2+ para SERCA y Ca2+-calmodulina para PMCA- presenta un arreglo más compacto de los segmentos transmembrana en ambas proteínas. El agregado de C28, un péptido que contiene la región autoinhibitoria de unión a calmodulina en la PMCA, causa un aumento de la marcación en SERCA. Estos resultados permiten postular que (a) péptidos hidrofílicos pequeños que se unen a la región citoplasmática modifican la región hidrofóbica transmembrana; (b) existen dos conformaciones estructuralmente diferentes E1activa y E1inhibida en las calcio-P-ATPasas que no había sido posible evidenciar mediante experimentos cinéticos. Con subsidios de ANPCYT, CONICET, UBACYT y NIH.