Inducción de callo y regeneración de plántulas in vitro de pasto llorón (Eragrostis curvula)

SOUZA CANADA ED; DIAZ AR; ECHENIQUE, V; PERMINGEAT H

Simposio; RedBio; 2017

CERZOS

La regeneración de plantas a partir de un sistema de cultivo de tejidos es a menudo la fase más crítica en un programa de mejoramiento. La gramínea, pasto llorón (Eragrostis curvula), se extiende en nuestro país por una extensa región de zonas tropicales y subtropicales. Debido a su escasa demanda de riego y fertilización, así como por su gran producción de biomasa en un período corto de desarrollo, la convierte en una gran candidata a ser propagada a nuevas regiones, pobres y semidesérticas. Su modo reproductivo -apomixis- restringe el uso de métodos convencionales de mejoramiento. Por eso desde hace años se ha recurrido a técnicas biotecnológicas para tal fin. Para esto, son prequisitos indispensables el desarrollo de un eficiente sistema de regeneración in vitro mediante el cultivo de tejidos y un protocolo de transformación, asociado a un mecanismo de selección. Por tal motivo, se comparó la inducción de callo embriógenico y su posterior regeneración en diferentes tipos de explantos y un medio de inducción con diferentes combinaciónes de una auxina y una citoquinina.El material de partida para la inducción de callo embriogénico fueron cuatro tipos de explantos del cultivar Don Walter INTA: a) base de hoja (aprox. 2 cm) y b) radículas (ambos de plántulas germinadas in vitro), c) granos maduros sembrados con el embrión hacia arriba y d) hacia abajo (para analizar el efecto de posición). El medio de inducción fue elaborado a base de las sales y vitaminas Murashige y Skoog (MS), sacarosa 2% y agar 0,8%, con un pH 5,8, el cual se suplementó con tres concentraciones (2, 10 y 30 mg.l-1) de ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D), con o sin la presencia de 0,01 mg.l-1 6-benzilamino purina (BAP), llegando a evaluar seis diferentes medios de inducción, más un control sin hormonas. El medio de regeneración fue el mismo que el básico anterior, sólo que con sacarosa 6% y 2 mg.l-1 de 2,4-D. La fase de inducción se desarrolló durante ocho semanas, en oscuridad, a 25 ± 2°C, y la fase de regeneración se llevó adelante bajo luz artificial proporcionada por lámparas fluorescente de luz blanca, con una intensidad de aproximadamente 55,2 µmol.m-2.s-1.Luego de ocho semanas de incubación, se observó la formación de callos blancos y friables, independientemente de las combinaciones de hormonas utilizadas en los medios de inducción, excepto en el control. La eficiencia de inducción de callos fue alta, 100% en los explantos derivados de radículas y de granos maduros con el embrión hacia arriba, 83,4-100% en explantos derivados de granos maduros con el embrión hacia abajo, y 71,4-100% en los explantos foliares. Luego, a las seis semanas de cultivo en medio de regeneración, la condición más eficiente para desarrollar plántulas, fue la que partió de granos maduros con el embrión hacia abajo, con un porcentaje de regeneración de hasta 43%. Una respuesta intermedia de regeneración se observó en los callos provenientes de granos con el embrión hacia arriba (hasta 25%), mientras que para los callos derivados de hojas inmaduras la regeneración resultó muy pobre (hasta 4%). No se logró regeneración de plantas a partir de callos derivados del cultivo de radículas. En relación a la concentración de hormonas en el medio de inducción, la condición de presencia de BAP y 10 mg.l-1 de 2,4-D fue la que brindo los mejores resultados. Lon callos expuestos a las mayores concentraciones de 2,4-D no respondieron regenerando plántulas.Como conclusión puede afirmarse que tanto el tipo de explanto y su posición, como el tipo y la concentración de fitohormonas empleadas en la fase de inducción de callo embriogénico, en oscuridad, determinan la eficiencia de regenerar en plántulas completas.