ANTICUERPOS SÉRICOS PROVENIENTES DE PACIENTES CON SÍNDROME DE SJÖGREN PRIMARIO DISPARAN EL PROCESO APOPTÓTICOS EN CÉLULAS DE LA LINEA A-253: PARTICIPACION DE CASPASA-3 Y MMP-3

REINA S. ; BORDA E

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

En el síndrome de Sjögren primario (SSp) se reportó un incremento del proceso apoptótico (PA) en las glándulas exócrinas asociando así su participación en la patogénesis del daño glandular en esta autoinmunidad. El objetivo de este trabajo fue evaluar si los anticuerpos anti-mAChR del subtipo M3, contenidos en la fracción de IgG sérica de pacientes con SSp, son capaces de disparar el PA en una línea celular A-253. Estudiamos el PA, la participación de la caspasa-3 y de la metaloproteinasa-3 (MMP-3) en el PA, a través de cultivo celular, de la transferencia terminal de deoxinucleótidos (TUNEL) e enzimoinmuno ensayos. Utilizamos una IgG antipéptido M3 (IgG-M3), purificada utilizando un péptido sintético correspondiente al 2do dominio extracelular del mAChR M3 humano. Los resultados demuestran que los IgG-M3 inducen el PA de las células A-253 de manera concentración y tiempo dependiente [IgG-M3:90%, 1x10-8M, 24h; Pilocarpina:85%, 1x10-7M, 24h; IgG normal:18%; basal:12%, n=8]. Este incremento se acompañó por un incremento en la generación de inositoles fosfato (InsP) [InsP: IgG-M3:226%±14; Pilocarpina:206%±16, n=6]. Ambos procesos fueron inhibidos por la atropina (bloqueante de los mAChR), como por el péptido sintético M3, respectivamente. El PA mostró un incremento en la actividad de la caspasa-3 [IgG-M3:7.91±06;Pilocarpina:8.81±07], y de la MMP-3 [IgG-M3:600±50; Pilocarpina:520±45;IgG normal:65±5.8;basal:60±5.1, n=6], y este incremento fue bloqueado por el J104794 (inhibidor del mAChR subtipo M3). El mecanismo intracelular responsable de los efectos biológicos de la IgG-M3 involucra a la fosfolipasa C, la calcio-calmodulina, y el calcio extra- e intra-celular, ya que el mismo fue inhibido por U-73122, W-7, verapamil, BAPTA y BAPTA-AM, respectivamente. En conclusión, la IgG-M3 sérica purificada de pacientes con SSp media el PA de las células A-253 contribuyendo así a la destrucción y/o atrofia de las glándulas salivales en el SSp con la consiguiente xerostomía.