Regulación Colinérgica del Fenómeno Apoptótico por Autoanticuerpos Séricos de Pacientes con Síndrome de Sjögren en Fibroblastos Humanos

SILVIA REINA, DANIELA PASSAFARO, LEONOR STEIN-BORDA, ENRI BORDA

Rosario, Santa Fé, Argentina

Congreso; LIII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Ondoltlogica; 2008

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Los fibroblastos son centinelas frente a señales peligrosas tempranas e inician eventos inmunológicos en procesos fisiológicos y patológicos sintetizando factores inmunomoduladores. Por su parte, la activación de los receptores muscarínicos colinérgicos (mAChR) modulan la apoptosis en diferentes tipos celulares. Hemos documentado que los anticuerpos (Ac) séricos de pacientes con Síndrome de Sjögren primario (SSp) activan a los mAChR M3 de las glándulas exócrinas. El objetivo de este trabajo fue investigar el efecto de los Ac dirigidos contra los mAChR M3 en el fenómeno apoptótico (FA) en fibroblastos gingivales humanos normales (FGHN). Por cultivo celular primario y por transferencia terminal de deoxinucleótidos (TUNEL) estudiamos la fragmentación del ADN en FGHN. Se utilizó una inmunoglobulina G antipéptido M3 (IgG-M3), purificada por afinidad en presencia del péptido sintético correspondiente al 3er dominio extracelular del mAChR humano. Mediante curva dosis respuesta, observamos que la IgG-M3 incrementó el FA en un 400% ± 45 (n=8) a una concentración máxima de 1x10-9M. La IgG normal (n=7) o la fracción no anti-péptido (n=8) no mostraron efecto en el sistema estudiado. El FA en los FGHN con IgG-M3 y pilocarpina, resultó tiempo dependiente (ef máx= 48 hs), e inhibido en un 75.6% ± 8.4 por el 4-DAMP (1x10-7M) y, por el péptido M3 (1x10-7M) en un 83.6% ± 7.4, sin ser modificado por el péptido no relacionado. Los efectos apoptóticos inducidos por la IgG-M3 fueron bloqueados en un 75% ± 7.6 por el inhibidor de la fosfolipasa C [U-73122 (5x10-6M)]; en un 50% ± 4.5 por el inhibidor de la proteína kinasa C [staurosporina (1x10-9)]; en un 40% ± 3.5 por el inhibidor de la calcio-calmodulina [TFP (5x10-6M)] y en un 98% ± 8.5 por el inhibidor de la óxido nítrico sintasa [L-NMMA (5x10-7M)]. Nuestros resultados sugieren que los Ac IgG-M3 presentes en el SSp, tienen la capacidad de incrementar el FA de FGHN, a través de la participación del sistema enzimático acoplado a los mAChR.