Function of repetitive elements of the 3'UTR of chikungunya virus in viral replication

FILOMATORI, CLAUDIA V.; BARDOSSY EUGENIA SOLEDAD; ALVAREZ DIEGO EZEQUIEL

CABA

Workshop; Workshop Biología celular y molecular del ARN; 2018

Instituto Leloir

El virus chikungunya (CHIKV) es un alfavirus transmitido por mosquitos. La región 3? no codificante (3?UTR) del genoma viral es muy heterogénea entre los distintos linajes y contiene un número variable de secuencias repetitivas. Los aislamientos que circulan en América tienen un 3?UTR con un mayor número de repeticiones que los virus ancestrales. Hasta el momento, se desconoce la función de estas secuencias en la replicación viral, así como los requerimientos en células humanas y de mosquito. Para estudiarlo contamos con el clon infeccioso de CHIKV obtenido a partir de un aislamiento de las Islas del Caribe, que contiene en su 3?UTR tres copias de la repetición (1+2) y dos copias de la repetición 3. Usando un sistema de genética reversa obtuvimos virus mutantes con distinto número de repeticiones, y evaluamos su infectividad en células de mamífero y de mosquito mediante inmunofluorescencias indirectas y curvas de crecimiento. Observamos que hay un requerimiento diferencial de secuencias en mamífero y mosquito. En mosquito la deleción triple de (1+2) disminuyó drásticamente la replicación, mientras que en mamífero no tuvo efecto. Deleciones intermedias no afectaron significativamente la replicación en mosquito, demostrando que estos elementos tienen una función redundante. Estos estudios demuestran por primera vez los efectos de la deleción sistemática de elementos repetitivos del 3?UTR de CHIKV americano en la replicación viral y su rol diferencial en mosquito y en mamífero.