ENSAYO DE CITOTOXICIDAD EN LA LÍNEA CELULAR CÓRNEA DE CONEJO SIRC (STE - OECD TG 491) PARA LA EVALUACIÓN DE TOXICIDAD OCULAR

LENZE, MARIELA; RESCHINI, AGUSTINA; WIKINSKI, SILVIA; GUTIÉRREZ, MARÍA LAURA

2022-02-01

2022-05-01

Sanidad animal

El presente estudio se realizó a pedido de la empresa Labyes S.A., con el objetivo de estudiar la potencial citotoxicidad en células corneales producida por dos concentraciones de benzocaína y su asociación a antibióticos contenidos en colirios, mediante la metodología STE (Short Time Exposure) conforme la guía de la OECD TG491.El procedimiento STE es un ensayo in vitro basado en un test de citotoxicidad realizado en una monocapa confluente de la línea celular de córnea de conejo - Statens Seruminstitut Rabbit Cornea (SIRC), cultivadas en placas de 96 wells. Después de 5 minutos de exposición a la sustancia test, la citotoxicidad es cuantificada como viabilidad relativa de las células utilizando el ensayo de metabolización del MTT en las mitocondrias. La disminución en la viabilidad celular está directamente relacionada a la disminución del metabolismo celular y es usada en la predicción de efectos adversos que llevan al daño ocular. El efecto citotóxico está asociado a la irritación ocular y por este motivo se emplea esta metodología para estudios de riesgo con fines regulatorios. Esta metodología ha sido adoptada y validada por la OCDE (Organización para la Cooperación y Desarrollo Económico) y su guía N°491 establece las condiciones para la realización del ensayo (OECD, 2020).Por otro lado, fue demostrado que el 80% de una solución que entra en el ojo de conejo es excretada por el saco conjuntival de 3 a 4 minutos, en cuanto que en el ojo humano más del 80% de la solución es excretada entre 1 y 2 minutos (Mikkelson et al., 1973). El método STE intenta aproximarse a estos tiempos breves de exposición y hace uso de la citotoxicidad como punto final para medir el daño a las células SIRC luego de 5 minutos de exposición al producto en estudio (Kojima et al., 2013).En el presente estudio se evaluaron dos concentraciones de benzocaína en aceite de ricino y sus controles correspondientes.