Desarrollo de abordajes metodológicos innovadores para la detección de potencial reversibilidad de daño ocular en un modelo in vitro de córnea bovina. Aplicación a la industria agroquímica

BENEDETTI, MARTINA; LENZE, MARIELA; RIVERO, MARTIN NICOLAS; RESCHINI, AGUSTINA; WIKINSKI, SILVIA; GUTIÉRREZ, MARÍA LAURA

Quilmes

Jornada; IV Jornadas de Investigadores en Formación en Ciencia y Tecnología, Universidad Nacional de Quilmes; 2021

Universidad de Quilmes

Uno de los requisitos para el registro de productos químicos, domisanitarios y fitosanitarios es aportar evidencia acerca de su potencialidad de daño ocular. El gold standard para obtener esta información es un ensayo en conejos conocido como test de Draize. Éste permite clasificar a los productos en cuatro categorías, considerando por un lado la severidad de las lesiones producidas en el ojo del conejo y por el otro el tiempo que las mismas tardan en revertir, cuando esto ocurre. La prueba de Draize es cada vez más cuestionada por su baja reproducibilidad, por sobrestimar el daño y por emplear animales vivos. Se ha invertido mucho esfuerzo en reemplazarla, pero los métodos alternativos aprobados no permiten documentar la reversibilidad del daño. En el daño corneal producido por la exposición química, hay dos puntos clave que pueden identificarse y determinarán la reversión del daño. En términos fisiopatológicos, los eventos destacables son el daño a nivel del epitelio corneal y la desorganización de los componentes del estroma subyacente. En este proyecto proponemos estudiar ambos eventos. Por un lado, evaluaremos la integridad de las células madre, responsables de la regeneración del epitelio corneal y por otro, estudiaremos cambios en la organización del estroma, mediados por citoquinas que intervienen en la diferenciación celular y que son indicadores de daño a largo plazo. Específicamente, nos proponemos estudiar, a través de un cultivo de células madre limales (LESC) y de un cultivo de explantes de zona limbal, si es posible detectar citotoxicidad, alteraciones en la capacidad de replicación y migración de las LESC cuando son expuestas a químicos que causan daño reversible. Asimismo, evaluaremos en un cultivo de córnea entera, si es posible predecir la reorganización del estroma mediada por el equilibrio entre los niveles de TGF-β e IL-1 y la proporción de queratocitos y miofibroblastos. Al concluir los objetivos propuestos, contaremos con evidencia que permita determinar cuáles de los abordajes empleados, o qué combinación de los mismos, permite detectar con especificidad la categoría de los productos de referencia de GHS y EPA. Luego, se pondrá a prueba la estrategia obtenida con mezclas complejas de fitosanitarios de categorización ya conocida. Si con el abordaje propuesto logramos predecir reversibilidad del daño ocular, habremos desarrollado una estrategia innovadora para reemplazar el uso de conejos en las pruebas de irritación ocular.