Extracción rápida y eficiente de ADN de levaduras enológicas: evaluación de dos métodos

MASSERA A.; MIRAS S. L.; MERCADO L.; COMBINA M.

Congreso; VI Congreso Latinoamericano de Micología; 2008

Diferentes herramientas de Biología Molecular se utilizan en la identificación de especies de levaduras involucradas en la producción de vino. El paso inicial en estas metodologías es la extracción del ADN, que debe proveer material adecuado para procedimientos posteriores. El objetivo del presente trabajo fue evaluar metodologías para extracción de ADN de levaduras enológicas. Se utilizaron 6 cepas de referencia Saccharomyces y no Saccharomyces, las cuales fueron crecidas en YPD líquido en distintas condiciones: 24, 48 y 72 h en tubo de ensayo y/o erlenmeyer. Se efectuaron extracciones por triplicado aplicando dos técnicas: extracción mediante lisis enzimática y extracción mecánica/química con perlas de vidrio y fenol. Se realizó la cuantificación de ADN con espectrofotómetro y por densitometría desde geles de agarosa. La cuantificación de ADN a partir de geles es rápida y fácil de realizar rutinariamente, pero menos sensible respecto al espectrofotómetro. La extracción química mecánica arrojó resultados óptimos con mínimas cantidades de proteína y ARN, siendo el tiempo de cultivo de 48 hs en tubo uniforme cuantitativa y cualitativamente. La extracción enzimática presentó mayor variabilidad y resultados óptimos en cultivo de 72 hs en tubo, pero la calidad del ADN no superó al otro método. El ADN extraído permitió ejecutar reacciones de PCR.