Estudio de las proteasas del látex de frutos de Araujia angustifolia (Hook et Arn.) Decaisne (Asclepiadaceae)

DAVID OBREGÓN; RENATA CURCCIARELLO; DANIELA LUFRANO

Florianópolis, Brasil

Jornada; X Jornadas de Jóvenes Investigadores de la A.U.G.M. y XII Seminario de Iniciación Científica; 2002

Asociación de Universidades Grupo Montevideo

La familia Asclepiadaceae se caracteriza por desarrollar laticíferos que frecuentemente contienen enzimas proteolíticas. La presencoia de proteasas contenidas en el látex de algunas especies de Araujia, Asclepias, Calotropis y Morrenia han sido estudiadas. El objetivo del presente trabajo es aislar las proteasas presentes en el látex de los frutos de A. angustifolia y realizar una caracterización y purificación preliminar de las mismas. El látex obtenido por incisiones transversales de frutos de A. angustifolia fue recogido sobre buffer fosfatos 0.1M (pH 7) con EDTA y cisteína 5mM y centrifugado sucesivamente  a 16.000 g  durante 30 minutos y a 100.000  g  una hora a 4 ºC, obteniéndose un “extracto crudo” conteniendo proteínas. El mismo mostró máxima actividad caseinolítica en un rango de pH 7.0-9.0. La misma fue inhibida por agentes bloqueantes de grupos sulfhidrilos (iodoacetato y E64). La preparación enzimática cruda manifestó ser estable a temperaturas de hasta 50ºC durante 30 minutos de incubación. Mediante isoelectroenfoque y su correspondiente zimograma se demostró que las fracciones proteolíticamente activas tienen valores de pI elevados. La purificación de las proteasas presentes en el látex se llevó a cabo por cromatografía de intercambio catiónico (SP Sepharose CL-6B Fast Flow, FPLC), obteniéndose dos fracciones proteolíticamente activas.