Optimización y comparación de métodos de diagnóstico molecular de Huanglongbing (ex Greening)

ORCE, INGRID; FILIPPONE, PAULA; SENDÍN, LORENA; ACOSTA, EUGENIA; MARTÍNEZ, VALERIA; FOGLIATA, GABRIELA; CASTAGNARO, ATILIO

Congreso; VI Congreso Argentino de Citricultura; 2010

La enfermedad Huanglongbing (HLB) es causada por diferentes especies de Candidatus Liberibacter: africanus (Laf) en África, americanus (Lam) en Brasil y asiaticus (Las) en Asia, Brasil y Florida. La dificultad de poder cultivar a la bacteria en medios artificiales ha obstaculizado la investigación sobre HLB. La detección e identificación del patógeno se dificulta en ausencia de síntomas o por una baja concentración de bacteria, sumado a la distribución desigual de las mismas tanto en el floema de la planta y como en el vector. El objetivo de este trabajo fue la comparación y optimización de métodos de diagnóstico molecular basados en la amplificación del ADN de la bacteria mediante PCR (del inglés “polymerase chain reaction”) convencional y PCR en tiempo real, empleando en este último caso dos sistemas de detección: “SYBRGreen” y “TaqMan”. La sensibilidad del PCR cuantitativo fue de 10 a 100 veces superior a la del convencional, mostrando el potencial de la primera para la detección de las especies de Ca. Liberibacter en bajas concentraciones, previo a la aparición de síntomas. TaqMan mostró mayor especificidad que SYBRGreen donde se detectaron falsos positivos, los cuales fueron eliminados con el ajuste de los parámetros del PCR. El sistema TaqMan mostró una elevada especificad tanto en la detección individual como simultánea de Las y Lam. A partir de la optimización de esta técnica en la Estación Experimental Agroindustrial Obispo Colombres, la misma fue implementada para el servicio de diagnóstico en el marco del Programa de Prevención de HLB en Argentina