Optimización y evaluación in vitro de micelas mixtas de deoxicolato de sodio y d-α-tocoferil polietilenglicol 1000 succinato para el transporte de Metotrexato

PISTILLO V. ; CAGEL M.; GONZALEZ L.; GROTZ E.; MORETTON M.A.; CHIAPPETTA D.A.; BERNABEU E.

Jornada; XIII Jornadas de Farmacia y Bioquímica Industrial (JorFyBi 2017); 2017

El Metotrexato (MTX) es uno de los agentes más estudiados y efectivos en el tratamiento de muchas neoplasias hematológicas, tumores sólidos malignos, y algunos trastornos autoinmunes1. Su eficacia terapéutica, sin embargo, se encuentra obstruida por graves efectos tóxicos, como así también por la aparición de resistencia por las células tumorales. Estas desventajas están fuertemente relacionadas con la baja solubilidad acuosa del fármaco (10 µg/mL) y también, con su perfil farmacocinético desfavorable2. Una de las principales complicaciones que limita la dosis que puede ser administrada, es la nefrotoxicidad. Como MTX es muy poco soluble a pH ácidos y es excretado principalmente a través de los riñones, el fármaco precipita en los túbulos renales produciendo su necrosis3. A pesar de las medidas preventivas, como la alcalinización de la orina y la hidratación del paciente, la toxicidad renal continua ocurriendo3. El diseño de formulaciones novedosas a través de la utilización de recursos nanotecnológicos tiene el potencial de resolver estos problemas4. En este estudio, se investigó la preparación de micelas mixtas de deoxicolato de sodio (DcNa) y tocoferil polietilenglicol 1000 succinato (TPGS) con la finalidad de mejorar la solubilidad acuosa de MTX y mantener su actividad antineoplásica. El DCNa es una sal biliar usada como agente solubilizante en productos farmacéuticos como por ejemplo, el Fungizone® (anfotericina B). El TPGS es un tensioactivo no iónico que deriva de la vitamina E, y forma parte de numerosos productos destinados a la vía oral, tópica y parenteral. MATERIALES Y MÉTODOSLas micelas se prepararon agregando directamente el MTX sobre una dispersión acuosa formada por una mezcla de DcNa y TPGS en diferentes proporciones molares (10:0; 7.5:2.5; 5:5; 2.5:7.5 y 0:10), las cuales fueron llamadas M1, M2, M3, M4 y M5, respectivamente. Las determinaciones correspondientes a tamaño y concentración micelar crítica (CMC) del sistema fueron realizadas utilizando dispersión dinámica de la luz (en agua destilada y a 25 °C). La morfología fue estudiada mediante microscopia electrónica de transmisión. La solubilidad aparente (Sa) de MTX en los sistemas micelares en agua y a diferentes pH fue determinada mediante UV/visible (306 nm). Las formulaciones que presentaron mejor performance fueron liofilizadas e investigadas. La liberación in vitro se realizó por el método de la membrana de diálisis en buffer fosfato pH=7,4. Para los estudios de viabilidad celular, se usaron células tumorales humanas provenientes de cáncer mama triple negativo (MDA-MB-231). La viabilidad celular se valoró por el método de la sal de tetrazolio, WTS (4-[3-(4-Iodofenil)-2-(4-nitrofenil)-3H-5-tetrazolio]-1,3-disulfonato de benceno). La solución inyectable de MTX usada fue de laboratorios Tuteur. RESULTADOSEntre las mezclas, la formulación M4 mostro la CMC mas baja (0,29 mM), mientras que las CMC de M1 y M5 fueron de 3,47 mM y 0,15 mM, respectivamente. Estos valores presentan concordancia con los reportados en la bibliografía. Todas las formulaciones mejoraron en distintos grados la solubilidad acuosa del MTX. La formulación M2 incremento más de 60 veces la Sa acuosa de MTX. Mientras que en la formulación M4, la Sa se incremento más de 9 veces a pH=2,2 y a pH=5,0. Entre las formulaciones que presentaron mejor performance, se destaco M4 que mostro un diámetro hidrodinámico de alrededor de 7 nm (PDI < 0,09); el cual, a diferencia del resto, se mantuvo en ese valor luego del proceso de liofilización (Tabla 1). Además, dicha formulación mostro la mejor performance en los ensayos de dilución. Morfológicamente las micelas formadas por dicho sistema se observaron como esferas. Los estudios de viabilidad mostraron un aumento significativo de la citotoxicidad para las micelas mixtas cargadas M4 (IC50= 0,19±0,23 µg/mL) en comparación con la solución de MTX (IC50= 1,24±0,21 µg/mL; p