Vehiculización de Anfotericina B en una formulación de microtubos lípidicos para aplicación tópica

SALERNO C.; CHIAPPETTA D.A.; ARECHAVALA A.; BREGNI C.

Buenos Aires

Jornada; XI Jornadas de Farmacia y Bioquímica Industrial; 2011

Asociación Argentina de Farmacia y Bioquímica Industrial.

Introducción y Objetivos: Los microtubos (MTs) son estructuras supramoleculares con extremos abiertos y un lumen interno de 0,5 μm. Estas estructuras se forman por autoensamblado molecular mediado por fuerzas del tipo Van der Waals, puente de hidrógeno, coordinación y π-π stacking. Las paredes pueden estar formadas por 1 o más capas lipídicas (1,2). Los MTs lipídicos han sido estudiados recientemente para el transporte de drogas, principalmente proteínas, con el objetivo de lograr una liberación controlada (3,5). Douliez et al. (2006) reportaron la formación de MTs a partir de la reacción del ácido 12 OH estéarico (12OHE) con monoetanolamina (ETA) en medio acuoso, de un modo muy sencillo, reproducible y con bajo costo (6). El objetivo de nuestro trabajo fue evaluar la capacidad de los MTs de 12OHE para vehiculizar anfotericina B (AmB), caracterizar el tipo de interacción del MT con el fármaco, estudiar la estabilidad fisicoquímica del sistema y probar in vitro la actividad antifúngica frente a distintas cepas de Cándida. Materiales y Métodos: Las suspensiones de MTs fueron preparadas mezclando 12OHE con una solución de ETA 1M y llevando a volumen con agua destilada. La mezcla se calentó a 75 °C en un baño de agua durante 15 minutos hasta fusión del lípido. Luego, se agitó la mezcla utilizando un vortex a máxima velocidad durante 2 minutos. Los MTs son formados a partir de la mezcla isotrópica durante el enfriamiento a temperatura ambiente. Los sistemas cargados con AmB fueron preparados de igual manera que los MTs blancos agregando el fármaco luego del calentamiento de la mezcla 12OHE-ETA antes de la agitación enérgica. Los sistemas se filtraron por membranas de 1,2 µm y la concentración del fármaco se determinó por espectrofotometría UV a una λ = 406 nm. La morfología de los sistemas fue caracterizada por microscopía de contraste de fases y transmisión electrónica (TEM). La interacción de los MTs con el fármaco se estudió por DSC (calorimetría diferencial de barrido) y ATR-FTIR (Reflectancia Total Atenuada-Espectroscopía Infrarroja por transformada de Fourier). La estabilidad de las suspensiones se evaluó durante 3 meses a 4 y 25 °C. Por último, se evaluó la actividad antifúngica in vitro frente a distintas cepas de Cándida. Resultados: Se prepararon suspensiones de MTs en concentraciones 0,5, 1 y 2 % de 12OHE con relación molar 12OHE:ETA 1:1. Los sistemas se cargaron con 1, 3, 5 y 7,5 mg/ml de AmB. Todas las formulaciones de MTs lograron solubilizar la carga de AmB agregada. Los sistemas con 1% resultaron ser más estables que el resto de las formulaciones. Los MTs al 0,5 y 2% se inestabilizan a la semana, se observó aparición de sedimento o cambio de aspecto en el sistema. El largo promedio de los MTs al 1% fue de 8,5 µm y el diámetro externo 0,7 µm (medidos por TEM). El número de MTs contado en cámara de Neubauer fue de 4,11x108 MTs/ml. Las supensiones resultaron ser estables en el período estudiado para ambas condiciones (Fig1). La estructura de los MTs vista al microscopio de contraste de fases y por TEM (Fig 2) no mostró diferencias con y sin fármaco. Los estudios por DSC y ATR-FTIR mostraron que habría una interacción fármaco-MT dado que se observan corrimientos de varios picos en los espectros (Fig 3 y 4). La suspensión de MTs al 1% presentó una concentración inhibitoria miníma (CIM) en el mismo orden que una formulación acuosa de AmB-desoxicolato comercial (0.06 y 0.03µg/ml, respectivamente) para varias cepas de Cándida. Conclusiones: El presente estudio reporta por 1ra vez la vehiculización de AmB en MTs lipídicos. Los MTs de ácido 12OHE permiten la incorporación de AmB en concentraciones varias veces superior a su solubilidad en agua (17.21±3.99 µg/ml). Los resultados obtenidos indican que la droga estaría interactuando con el lípido posiblemente en la formación de la pared, lo cual se explicaría con las características anfifílicas del fármaco. Los sistemas resultaron estables al menos durante 90 días y la actividad antifúngica no se vió afectada. La formulación de MTs 1% cargada con AmB (1 mg/ml) resulta con alto potencial para el uso propuesto.