Cromatografía líquida multidimensional (Quiral x Aquiral). Aplicación a la enantioresolución de DNP-aminoácidos en muestras complejas

ACQUAVIVA, AGUSTÍN; SIANO, GABRIEL; FILGUEIRA, MARCELO; CASTELLS, CECILIA

Santa Rosa, La Pampa

Congreso; 10º Congreso Argentino de Química Analítica; 2019

Universidad Nacional de La Pampa

Las muestras biológicas,ambientales y de origen natural son generalmente mezclas altamentecomplejas en las que los compuestos de interés pueden aparecer comoconstituyentes menores. Como consecuencia, un gran exceso deinterferencias puede dificultar la determinación directa de loscompuestos de interés. El ensayo de muestras quirales agrega unacomplejidad adicional.La mayoría de lasseparaciones de enantiómeros por HPLC se realizan con columnasrellenas con una fase estacionaria quiral (FEQ) operada con una fasemóvil aquiral. Un problema común que se encuentra con estamodalidad es la selectividad química intrínsecamente limitada delos rellenos quirales, sumado a las eficiencias bastante limitadas.Esto significa que las mezclas complejas de diversos pares deenantiómeros no pueden analizarse en un único análisis debido a lasuperposición de picos, y más aún cuando el analito está presenteen muestras muy complejas que contienen otros compuestos aquiralespertenecientes a la matriz, que puede coeluir con los picos deenantiómeros.Lasseparaciones quirales en 2D-LC se desarrollan comúnmente en columnasde la segunda dimensión, especialmente en el modo ?Heart-cutting?1(solofracciones seleccionadas del eluyente de la 1D pasan a la 2D). Sinembargo, para mejorar el uso de un sistema 2D-LC, en este trabajo seusó la modalidad ?comprehensive? (donde toda fracción que salede la 1D ingresa a la 2D), seleccionando a la FEQ en la 1D basados ensu menor eficiencia cromatográfica, lo que permite muestrear cadapico varias veces. Y la 2D-LC se completa con una segunda dimensiónque se desarrolla muy rápido para no perder la resolución obtenidaen la 1D, y con la mejor selectividad ortogonal para obtener la mayorcapacidad de picos para el análisis quiral de aminoácidos enmuestras complejas. De esta manera pudimos demostrar la viabilidad deanálisis enantioselectivo de mezclas naturales complejas. Las columnas quiralesseleccionadas consisten en Quinina unida a mercaptopropilsilica, conuna reacción final de recubrimiento con 1-hexeno3.El potencial enantiorreconocimiento de estas columnas se estudió enmodo de intercambio aniónico con aminoácidos racémicosderivatizados con el reactivo de Sanger (DNP-aminoácidos).Otra ventaja del métododesarrollado es la aplicación de una bomba divisora de flujo quepermite: 1) ajustar fácilmente el volumen de muestra (con elsolvente fuerte) transferido a la segunda dimensión y 2) utilizar uncaudal independiente en la primera dimensión, sumado a un rápidore-equilibrio y un mejor uso del espacio de separación de la 1D2.El presente métodoLCxLC se optimizó con respecto a las características de la muestray teniendo en cuenta todos los parámetros que influyen en lacapacidad de pico bidimensional (ortogonalidad, frecuencia demuestreo, compatibilidad de las dimensiones, etc.).1M.Eugenia Leon-Gonzalez, et. al., Biomed. Chromatogr. 2014; 28, 59-83.2M.R. Filgueira, et. Al., Anal. Chem., 2011, 83 924), 9531-9539.3S.Keunchkarian et.al., J. Chromatogr. A 1218 (2011) 3660-3668.p { margin-bottom: 0.25cm; direction: ltr; line-height: 115%; text-align: left; background: transparent none repeat scroll 0% 0%; }a:link { color: rgb(0, 0, 128); text-decoration: underline; }a:visited { color: rgb(128, 0, 0); text-decoration: underline; }p { margin-bottom: 0.25cm; direction: ltr; line-height: 115%; text-align: left; background: transparent none repeat scroll 0% 0%; }a:link { color: rgb(0, 0, 128); text-decoration: underline; }a:visited { color: rgb(128, 0, 0); text-decoration: underline; }