El contenido de tubulina de membrana en eritrocitos humanos afecta la distribución asimétrica de fosfatidilserina

BALACH M; SANTANDER VS; MONESTEROLO NE; CASALE CH; CAMPETELLI AN

Córdoba

Jornada; XXII Jornadas de la Sociedad de Biología de Córdoba; 2019

Sociedad de Biología de Córdoba

Los fosfolípidos de las membranas biológicas se encuentran distribuidos de forma asimétrica. Esta asimetría tiene importantes funciones a nivel celular, la misma es generada y mantenida por escramblasas, flopasas y flipasas. Mientras que las flopasas expulsan fosfolípidos desde el lado interno al externo de la membrana, las flipasas lo hacen en el sentido inverso. Ambas enzimas son ATPasas, en particular las flipasas pertenecen a la familia de las P4-ATPasas, como NKA y PMCA, las cuales están reguladas por tubulina. En eritrocitos de personas diabéticas e hipertensas, la tubulina asociada a la membrana se encuentra aumentada con respecto a eritrocitos de personas sanas (control), este aumento de tubulina produce inhibición parcial de la actividad de NKA, PMCA, por lo tanto el objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de la tubulina sobre la actividad flipasa en membrana plasmática de eritrocitos de pacientes diabéticos e hipertensos y establecer una relación con el contenido de tubulina en la membrana de estas células. Para ello, se utilizó el análogo fluorescente de fosfatidilserina (PS) NBD-PS y eritrocitos de individuos diabéticos e hipertensos, o eritrocitos normales en donde la cantidad de tubulina de membrana se modificó farmacológicamente. La distribución de NBD-PS en la membrana fue determinada por citometría de flujo. Los resultados mostraron que eritrocitos de individuos hipertensos y diabéticos exponen un 10 % más de NBD-PS que los eritrocitos normales. La incubación de eritrocitos normales con taxol, que induce la asociación de tubulina a la membrana, resultó en una disminución del 50% en la traslocación de NBD-PS con respecto al control. Por el contrario, en células donde la cantidad de tubulina asociada a la membrana se disminuyó con nocodazol, el porcentaje de NBD-PS traslocado fue mayor que en el control. Esta regulación por parte de tubulina también fue observada en células K562 eritropoyéticas. La incubación con o-vanadato, un inhibidor irreversible de P-ATPasas, corroboran que el efecto observado en los experimentos anteriores se debe a la regulación de la flipasa y no de las flopasas. Finalmente el uso de Anexina V-PE, la cual se une específicamente a la PS endógena ubicada en la cara externa de la membrana de células intactas, demostró que los eritrocitos de individuos hipertensos y diabéticos muestran mayor exposición de PS en el lado extracelular con respecto a eritrocitos control, lo que confirma la disminución de la actividad flipasa en estos sujetos. Los resultados presentados sugieren que en la membrana plasmática de los eritrocitos existe una relación entre el contenido de tubulina en la membrana y la distribución asimétrica de PS. Estos resultados demuestran un nuevo rol de la tubulina en la biología celular como reguladora de la asimetría de los fosfolípidos en la membrana plasmática.