IDENTIFICACIÓN DE COMPUESTOS INHIBIDORES DE BROMODOMINIOS DE Trypanosoma cruzi A PARTIR DE PRODUCTOS NATURALES MODIFICADOS

ALONSO; RAMALLO, IA; RUA, F; SERRA, E; FURLAN, RLE

Santa Fe

Conferencia; XXVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias - SIMPOSIO Internacional de Biología Celular y Molecular de la Enfermedad de; 2016

Sociedad Argentina de Protozoología

Los Bromodominios son los únicos dominios proteicos capaces de reconocer e interaccionarcon lisinas acetiladas. Trypanosoma cruzi, el agente causal de la Enfermedad de Chagas,presenta un bromodominio atípico (denominado TcBDF3) capaz de interaccionar con la α-tubulinaacetilada presente en el citesqueleto de este organismo. No existen reportes en otroseucariotas de Bromodominios con funciones fuera del núcleo, lo que hace a TcBDF3 un interesanteblanco para el desarrollo de nuevas drogas tripanocidas. Recientemente, se han descriptonuevos compuestos inhibidores de Bromodominios humanos para el tratamiento dedistintas patologías, demostrando que se trata blancos quimioterapéuticos válidos. Nosplanteamos buscar quimiotipos capaces de interrumpir la interacción entre TcBDF3 y α-tubulina acetilada a partir de bibliotecas de productos naturales químicamente modificados yevaluar su potencial tripanocida en todos los estadios del ciclo de vida de T. cruzi, Contamoscon un ensayo de atenuación de la fluorescencia en microplacas de 96 pocillos. El fundamento delmétodo se basa en la modificación de la fluorescencia de triptófanos debida a la interacción de la proteína con un ligando ya que TcBDF3 presenta un triptofano en su bolsillo deunión al ligando acetilado. Con este ensayo se evaluó la presencia/ausencia de compuestos quese unen a TcBDF3 en 19 extractos diversificados especies vegetales. Los mismos se prepararonsometiendo a reacción con exceso de clorhidrato de hidroxilamina en etanol reflujo por 4 hs a losrespectivos extractos metanólicos. El extracto modificado de Paspalum dilatatum Poir (Poaceae)fue el que presentó mayor bioactividad. Su fraccionamiento bioguiado llevó al aislamiento eidentificación de la oxima del (E)-4-hidroxi-3- metoxibenzaldehído como responsable de laactividad observada. Luego se corroboró la interacción de este compuesto con TcBDF3mediante Thermal Shift y se calculó la constante de disociación de esta interacción (0.3 μM). Porotro lado, se evaluó la actividad tripanocida de este compuesto en epimastigotes, tripomastigotesy amastigotes de T. cruzi, obteniéndose CI50 entre 5 y 10 μM según el estadio y un índice deselectividad de 6 sobre la línea celular Vero.Podemos concluir que TcBDF3 es una blanco quimioterapéutico interesante y el compuestoencontrado puede ser un punto de partida para la búsqueda de inhibidores con mejores actividadestripanocidas.