CONDENSADOS INTRANUCLEARES DEL RECEPTOR DE GLUCOCORTICOIDES EN LA MODULACIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN

BELÉN BENITEZ; DIEGO M PRESMAN; VALERIA LEVI

Quilmes

Jornada; V Jornadas de Investigadores e Investigadoras en Formación (JIF) en Ciencia y Tecnología; 2023

Departamento de Ciencia y Tecnología de la Universidad Nacional de Quilmes

El núcleo celular está altamente organizado en una variedad de compartimentos sin membrana que concentran determinadas biomoléculas con funciones específicas, incluidas las implicadas en la regulación transcripcional. Evidencias recientes apoyan que muchos de estos compartimentos se forman por un proceso de separación de fases líquido-líquido (LLPS). El receptor de glucocorticoides (GR) es un factor de transcripción activable por ligando que se transloca al núcleo tras la unión de la hormona y se particiona entre el nucleoplasma y múltiples focos nucleares discretos. Nuestro grupo ha demostrado que los focos del GR presentan propiedades compatibles con las esperadas para condensados formados por LLPS en células vivas. Sin embargo, el papel biológico de estas estructuras permanece desconocido. Aquí, exploramos el rol de los condensados intranucleares del GR en la modulación de la transcripción. Utilizamos técnicas avanzadas de microscopía de fluorescencia que permiten analizar, en células vivas, la dinámica de la interacción entre GR y otros factores proteicos involucrados en la respuesta transcripcional. Observamos que existen al menos dos poblaciones de condensados de GR activos que difieren en su tamaño e intensidad. Además, los foci de GR colocalizan con coactivadores relacionados con la transcripción, por ejemplo, NCoA2 y Med1 (Subunidad 1 del complejo Mediador). Por otro lado, estudiamos la existencia de una correlación entre la formación de focos y la condensación local de la cromatina y corroboramos que los foci de GR son excluidos de las regiones de cromatina compactada. Adicionalmente, analizamos el rol de los RNA nacientes sobre la formación de los condensados de GR y evidenciamos que la inhibición de la elongación de la transcripción conduce a una disminución en la densidad de foci, a la vez que aumenta la intensidad relativa y el tamaño de los mismos. Finalmente, para evaluar si el estado de oligomerización del GR, es un factor importante en la formación de los condensados, utilizamos mutantes de GR carentes de ciertos dominios estructurales o con mutaciones puntuales, advertimos que la formación de foci se ve alterada. En conjunto, nuestros resultados sugieren que los condensados de GR son condensados con un posible rol modulador en la transcripción al interaccionar con proteínas relacionadas a este proceso y su formación no requeriría de un cierto estado de compactación de la cromatina pero si esta influenciada por los estados de oligomerización del GR. Además, las distintas poblaciones de foci de GR serian funcionalmente diferentes en relación a su participación en el proceso de transcripción.