INVESTIGADORES
OCAMPO Josefina
congresos y reuniones científicas
Título:
Trans-splicing alternativo del ARNm de TcSET23 genera 2 transcriptos de diferente abundancia en epimastigotes de T. cruzi
Autor/es:
SANTIAGO CARENA; ARTURO MUÑOZ-CALDERÓN; GUILLERMO D ALONSO; JOSEFINA OCAMPO
Lugar:
La Plata
Reunión:
Congreso; XXXIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de protozoología; 2023
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de protozoología
Resumen:
Trypanosoma cruzi posee un ciclo de vida complejo, en el que se expone a cambios abruptos en su entorno. Como respuesta a estos cambios, el parásito alterna entre tres estadios bien definidos: epimastigote, forma replicativa extracelular presente en el insecto; tripomastigote, forma infectiva no replicativa; y amastigote, forma replicativa intracelular capaz de diferenciarse nuevamente al estadio tripomastigote. Su alternancia entre estadios involucra cambios en la expresión génica, regulados mayormente a nivel post-transcripcional. Esta alternancia está en parte modulada a nivel epigenético mediante modificadores post-traduccionales de histonas. Dentro de estos, se encuentran las metiltransferasas SET. En el genoma de T. cruzi existen diversos genes de esta familia que no han sido caracterizadas hasta el momento. En este trabajo nos enfocamos en estudiar a TcSET20 y TcSET23 por presentar propiedades conservadas respecto a SETs estudiadas en organismos modelo. Utilizando parásitos de la cepa CL Brener, evaluamos la expresión de sus ARN mensajeros (ARNm) mediante RT-PCR y comprobamos que los ARNm de ambas TcSET se expresan en los estadios de epimastigote, tripomastigote y amastigote. Adicionalmente, observamos que el ARNm correspondiente a TcSET23 posee dos isoformas que serían producto de un proceso de trans-splicing alternativo, difiriendo únicamente en el largo de la región 5 no codificante. Ensayos preliminares de RT-qPCR utilizando primers específicos de cada isoforma indican que la isoforma más larga de TcSET23 tiene un mayor nivel de expresión que la corta y que TcSET20 en epimastigotes. Mediante un análisis in silico, observamos que la región 5 UTR más larga posee una estructura secundaria mucho más estable, sugiriendo que el 5 UTR largo le podría otorgar una mayor vida media al transcripto respecto a la forma corta. Estamos realizando curvas de calibración para su cuantificación y vamos a extender el análisis cuantitativo a otras formas del parásito.
