Método para la extracción de RNA basado en el uso nanopartículas magnéticas

CAPRIOTTI, NATALIA; ONS, SHEILA; TRAVERSO, LUCILA; ROMANOWSKI VÍCTOR; PIDRE, MATÍAS LUIS; FERRELLI, MARÍA LETICIA; LOPEZ MARIA FLORENCIA; AMOROS, LESLIE; MENDOZA ZELIS, PEDRO; JUNCAL, LUCIANA; DE SOUSA, ELISA; SCHILARDI, PATRICIA ; LILLIO, CRISTIAN; RODRIGUEZ TORRES, CLAUDIA

Congreso; 6º Simposio Argentino de Procesos Biotecnológicos; 2021

UNIVERSIDAD NACIONAL DE MISIONES

Elaislamiento y purificación de RNAdecalidad es un paso fundamental para asegurar una alta especificidad ysensibilidad en la detección, cuantificación y diagnóstico deenfermedades por RT-qPCR. Los métodos de obtención de ácidosribonucleicos deben ser robustos y de alto rendimiento con altacapacidad de fabricación y distribución. En la actualidad, lamayoría de los kitscomerciales utilizados son costosos, poseen a menudo múltiplescomponentes que no son fácilmente reemplazables y su suministro nose puede garantizar dado que son importados. Además, algunos deellos requieren de equipamiento sofisticado, no siempre disponiblesen los laboratorios de investigación y diagnóstico. Por ende, lametodología disponible no ofrece suficiente flexibilidad ydisponibilidad cuando se trata de una gran epidemia o una pandemia,como lo es la de COVID-19. El objetivo del trabajo es proporcionar unprotocolo de extracción de RNA basado en perlas magnéticas desílice de bajo costo, independiente de equipamiento sofisticado y deproducción nacional. El procedimiento de extracción por este métodoincluye etapas de inmovilización rápida y eficiente de lasmoléculas de RNA sobre la superficie de las nanopartículas y laposterior aplicación de campos magnéticos lo cual permite separarde forma rápida y eficiente los ácidos nucleicos evitando pasos decentrifugación. El cambio en la concentración de sales en el mediopermite una elución eficiente para los posteriores pasos deamplificación por el método de elección. Se han realizado pruebasde extracción en distintas muestras biológicas: tejidosprovenientes de insectos, línea celular de pulmón y muestras dehisopado oro- y nasofaríngeos de pacientes sospechados de tenercoronavirus obteniéndose niveles de rendimiento y calidad de RNAsimilares a los kitsdisponibles comercialmente y, además hemos obtenido niveles de Ct(-Cyclethreshold-)igualablespor RT-qPCR. En esta presentación se describirán los antecedentesde esta metodología, el estado actual del proyecto y lasperspectivas de implementación en laboratorios de diagnóstico y debiología molecular.p { margin-bottom: 0.1in; direction: ltr; line-height: 115%; text-align: left; orphans: 2; widows: 2; background: transparent }a:link { color: #0563c1; text-decoration: underline }