Obtención de baculovirus de Anticarsia gemmatalis recombinantes con proyección a la generación de bioinsecticidas mejorados

HAASE SANTIAGO; FERRELLI MARÍA LETICIA; SALVADOR RICARDO; SANCHEZ VALLDUVI MM; BERRETTA MARCELO FACUNDO; SCIOCCO-CAP ALICIA ; ROMANOWSKI VÍCTOR

Villa Giardino

Encuentro; XXX Reunión Científica Anual de la SAV; 2010

Sociedad Argentina de Virología

Los bioinsecticidas constituyen una de las herramientas más convenientes para el control de plagas en la búsqueda de una agricultura sustentable, por su escaso grado de impacto ambiental. Entre los candidatos a bioinsecticidas, los baculovirus representan una alternativa promisoria, debido a su alta virulencia y especificidad. En Argentina, la oruga de las leguminosas Anticarsia gemmatalis es una de las principales plagas de la soja y otros cultivos. El baculovirus AgMNPV es el de uso más extendido como agente de control biológico. Sin embargo, en regiones templadas presenta algunas desventajas, entre ellas, el tiempo de acción relativamente lento. Esto ha motivado el desarrollo de AgMNPV recombinantes con modificaciones destinadas a disminuir el tiempo de acción del virus. La estrategia se basa en la doble recombinación homóloga entre el genoma viral linealizado y un vector de transferencia que contiene el gen de la proteína a expresar bajo el control del promotor viral de poliedrina. Para optimizar la recuperación de virus recombinantes, se utiliza un virus que no contiene el gen de poliedrina, el cual es restituido a través la recombinación con el vector de transferencia. Objetivo Generación de AgMNPV recombinantes y evaluación de la expresión de los genes heterólogos insertados. Materiales y métodos. Se desarrolló el vector de transferencia pI3, en el cual se introdujo el gen de la proteína verde fluorescente (egfp). El DNA plasmídico pI3-GFP se cotransfectó con el DNA viral linealizado en células Hi5. Una vez que se observó la producción de poliedros en el cultivo celular, éste fue utilizado para la infección per os de larvas de A. gemmatalis. A partir de los poliedros se aisló DNA viral para su caracterización por PCR y patrones de restricción. La infección en cultivos celulares fue seguida por microscopía de contraste de fase y de fluorescencia; además, se analizaron los perfiles de proteínas mediante SDS-PAGE. El mismo método fue utilizado para la obtención de recombinantes de AgMNPV que expresan diferentes genes de interés. Resultados Se confirmó la estructura genética de los plásmidos y del virus recombinante AgMNPV-egfp a través de patrones de restricción y PCR y se observó expresión de egfp mediante microscopía de epifluorescencia, tanto en cultivos celulares como en disecciones de tejidos de A. gemmatalis infectados. La síntesis de GFP fue confirmada por electroforesis de proteínas. Se observó un efecto dramático sobre las larvas en el caso de infecciones con el recombinante que expresa el gen de una toxina específica de insectos. Conclusiones Se desarrolló un sistema de recombinación para la producción de AgMNPV que expresan proteínas heterólogas con proyección al mejoramiento de la capacidad bioinsecticida del virus.