INVESTIGADORES
LEVIN Gustavo Javier
congresos y reuniones científicas
Título:
DIVERSIDAD GENÉTICA DEL VIRIOPLANCTON PROVENIENTE DE DIFERENTES AMBIENTES ACUÁTICOS ANTÁRTICOS
Autor/es:
LOPEZ, JOSE LUIS; LEVIN, GUSTAVO; CULASSO, ANDRES; MAC CORMACK, WALTER; CAMPOS, RODOLFO
Lugar:
Buenos Aires, Argentina
Reunión:
Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Virología
Resumen:
La diversidad microbiana es fundamental para el mantenimiento y conservación de los recursos genéticos globales. La exploración de ambientes extremos ha hecho evidente una gran riqueza de la diversidad microbiana, esto incentiva el estudio de los ambientes antárticos poco estudiados hasta la actualidad. El objetivo de este trabajo fue determinar la diversidad genética del virioplancton antártico tanto a partir de agua dulce (líquida y sólida) como salada. La estrategia experimental utilizada consistió en la filtración en serie (fibra de vidrio de 5 μm, acetato de celulosa 0,2 μm y Zeta Plus 50S) de agua proveniente de diferentes ecosistemas cercanos a la Base Jubany, Antártida Argentina, durante el período enero-marzo de 2008. Esta estrategia de filtración retiene en el filtro Zeta Plus (con carga positiva) el material genético disuelto y las micropartículas con carga negativa (cápsides virales y eventualmente bacterias más pequeñas que 0,22 μm). Estas muestras incluyeron 2 fragmentos de hielo glaciario que fueron fundidos previo a su filtración. Se realizaron extracciones diferenciales de ácidos nucleicos totales, disueltos y encapsidados. Luego se realizaron amplificaciones (en una sola ronda) con seis primers al azar de la serie Operon (RAPD-PCR). Los perfiles electroforéticos de los productos de PCR fueron analizados con la asistencia de los programas Total Lab 100 y RAPD-PLOT en función de determinar la diversidad genética y las relaciones de similitud e identidad de los amplicones. También se realizó el clonado molecular y posterior secuenciación nucleotídica de los amplicones de mayor tamaño provenientes de una de las muestras de hielo glaciario. Los extractos de acidos nucleicos totales a partir de las trece muestras analizadas fueron amplificados con al menos 5 de los 6 primers utilizados. OPA-20 fue el más informativo de los primers utilizados, dado que produjo un total de 50 fragmentos diferentes entre las 13 muestras estudiadas. El rango de tamaños de los fragmentos amplificados estuvo comprendido entre 96 y 2370 pares de bases. Las muestras más complejas mostraron 16/50 fragmentos, en tanto que la menos compleja mostró solo 6/50 fragmentos. Estos resultados evidencian la utilidad de la amplificación al azar como herramienta para la descripción genética de ambientes extremos. Respecto de las relaciones filogenéticas entre los diferentes amplicones su análisis reveló que las muestras agruparon mejor respecto de su sitio de origen mediante un análisis de (1- % MATCH) que con el cálculo de (1-SIMILARITY). Los patrones electroforéticos de los amplicones provenientes del ADN total fueron diferentes de aquellos producidos a partir de extractos nucleicos resistentes a nucleasas. Esto es evidencia indirecta de la presencia de ADN protegido (eventualmente encapsidado). A su vez, en el presente se está intentando la visualización bajo microscopio electrónico del material particulado adsorbido a los filtros Zeta Plus. Finalmente, las secuencias nucleotídicas de 14 clones moleculares obtenidos a partir de ADN total de hielo glaciario se mostraron distantemente relacionadas con secuencias desconocidas provenientes de diferentes estudios de metagenómica marina ya almacenadas en los bancos de datos. CONCLUSIONES: Estos resultados preliminares constituyen el primer aporte sobre la diversidad genética del virio-plancton antártico y su monitoreo futuro aportará evidencias del impacto ecológico de los cambios climáticos globales.