“Análisis del polimorfismo generado por diferentes técnicas moleculares en dos líneas de soja que contiene genes mayores de resistencia al cancro del tallo.”

CHIESA, MARÍA A.; CAIRO, CARLOS; GOSPARINI, CARLOS; PIOLI, ROSANNA & MORANDI, ELIGIO

Santa Rosa, La Pampa, Argentina

Congreso; XXV Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2004

Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal (SAFV)

Análisis del polimorfismo generado por diferentes técnicas moleculares en dos líneas de soja que contienen genes mayores de resistencia al cancro del tallo. María A. Chiesa1; Carlos A. Cairo1; Carlos O. Gosparini1; Rosanna N. Pioli2 & Eligio N. Morandi1 1Fisiología Vegetal y 2Fitopatología, Fac. Cs. Agrarias, UNR.  Campo Experimental J. Villarino. CC 14 (2125) Zavalla, Santa Fe, Argentina, emorandi@unr.edu.ar La enfermedad del cancro del tallo (ECT) de la soja (Gyicine max (L) Merr.) originada por el complejo fúngico Diaporthe phaseolorum var. meridionalis, es una enfermedad muy destructiva que originó daños severos con pérdidas muy grandes en las campañas 1996/97 y 1997/98 en las regiones productoras de soja más importantes de nuestro país. El primer objetivo del siguiente trabajo es la detección de marcadores moleculares (MM) polimórficos, asociados a los genes mayores de resistencia contenidos en distintas líneas resistentes, los cuales pueden ser utilizados posteriormente en programas de mejoramiento y selección asistido por marcadores (SAM). La línea  Tracy-M posee dos alelos dominantes para la resistencia, (Rdm1 y Rdm2), en forma homocigota. Se utilizaron también para el análisis dos líneas hermanas F4: R-1 (Rdm1) y R-2 (Rdm2), mejoradas y provenientes de la cruza de Tracy-M y de la línea susceptible J77339, que poseen cada una de ellas uno de los alelos en forma homocigota. Se llevaron a cabo tres técnicas moleculares para la obtención de MM polimórficos: i) RAPD (ADN Polimórfico Amplificado al Azar), ii) AFLP (Polimorfismo en la Longitud de los Fragmentos Amplificados) y iii) SSR (Repeticiones de Secuencias Simples o Microsatélites). La extracción del ADN genómico se realizó por el método CTAB, con algunas modificaciones. Se analizaron 400 cebadores oligodecámeros de secuencias al azar resultando en 11 cebadores RAPD polimórficos (2.75%) entre las líneas. Además, se analizaron 166 combinaciones de cebadores se secuencias al azar de marcadores AFLP. 118 no mostraron polimorfismo entre las líneas, sin embargo se encontraron 48 combinaciones de cebadores polimórficos de AFLP (28.92%) que generaron un total de 4138 bandas. De estas bandas, 344 (8.31%) eran polimórficas pero sólo 99 (2.39 %) son de interés para su posterior análisis de ligamiento a las resistencias descriptas, es decir, se hallan sólo en genotipos con genes de resistencia y están ausentes en el genotipo susceptible. Sesenta y cinco fragmentos amplificados (1.57%) sólo se presentaron en  R-1 y en Tracy-M, mientras que 34 (0.82%) sólo aparecieron en el genotipo R-2 y en Tracy-M. Por último, los resultados obtenidos por la técnica de microsatélites mostraron que de los 66 pares de cebadores analizados, sólo 6 (9.19%) mostraron un patrón polimórfico de bandas entre las líneas, siendo 5 (7.58%) de interés para el análisis de ligamiento con respecto a la resistencia contenida en R-II y sólo 1 banda (1.52%) de interés para R-I. Para determinar, en una segunda instancia, el grado de ligamiento de los MM polimórficos detectados a los genes de resistencia en cuestión, están siendo desarrolladas diferentes familias de Líneas mejoras por Recombinación (LMR). Para este fin, líneas R-1 y R-2 se cruzaron entre sí (en forma cruzada) y con la línea susceptible J77-339.