Utilización del 2,3,5-cloruro de trifeniltetrazolio como indicador de desarrollo en bacterias simbióticas fijadoras de nitrógeno

ZABALOY, MARÍA CELINA; GÓMEZ, MARISA ANAHÍ

Rosario

Congreso; VI Congreso y XXIV Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2004

Sociedad de Biología de Rosario-UNR

El 2,3,5-cloruro de trifeniltetrazolio (TTC) es un colorante muy utilizado para visualizar el desarrollo microbiano en diferentes medios de cultivo y en tests de identificación taxonómica. El TTC, incoloro en su forma oxidada, cuando es reducido por la acción enzimática de los microorganismos vivos, se convierte en formazán, que es color rojo. Por otro lado, el TTC en altas concentraciones puede inhibir el desarrollo microbiano. Los objetivos de este trabajo fueron: 1) encontrar la concentración óptima de TTC que permita detectar desarrollo en los rizobios; 2) verificar la frecuencia de rizobios capaces de reducir de TTC; 3) evaluar si es posible utilizarlo en medios de cultivo para detección de degradación o resistencia a compuestos orgánicos complejos. Se testearon 77 cepas de rizobios, pertenecientes a los géneros Rhizobium, Sinorhizobium, Bradyrhizobium, y Mesorhizobium. Cultivos líquidos de las cepas se sembraron, por duplicado, en medio de cultivo LMA con distintas concentraciones de TTC (0,005%, 0,01%, 0,015%, 0,025% y 0,05%). Sólo las colonias que desarrollaron color rosa o rojo se consideraron reductoras del TTC. Las cepas que no lograron un desarrollo significativo en este medio en comparación con el medio testigo (LMA) se considera que fueron inhibidas por el TTC. Empleando una concentración de TTC de 0,01% se observó el menor porcentaje de inhibición de cepas (19,2%) y fue posible la diferenciación de las colonias reductoras (72,6%) de las no reductoras. Posteriormente, las mismas cepas fueron sembradas en el medio mínimo Bergersen (MMB) con 0,01% de TTC. Este medio se empleó en una etapa posterior del trabajo como medio base para testear en los rizobios la utilización de distintos herbicidas como sustratos de crecimiento. El 25% de las cepas estudiadas no desarrolló en MMB luego de 8 días de incubación en estufa a 28ºC. De las restantes cepas, el 12,3% fueron inhibidas y el 78,9% redujo el TTC en MMB. Cuando se evalúa la utilización de un sustrato en los rizobios mediante la reducción del TTC, la falta de color podría deberse a la incapacidad de utilizar el sustrato, aunque nuestros resultados muestran que no debe descartarse la inhibición del desarrollo o la no reducción del TTC por parte del organismo en estudio. En conclusión, se debería conocer previamente el efecto de este colorante en combinación con el medio de cultivo sobre los grupos bacterianos de interés para poder utilizarlo con seguridad como indicador del desarrollo.