Desarrollo de un radioinmunofármaco basado en nanoanticuerpos de camélidos contra EGFR marcado con 177Lu y su caracterización terapéutica

MARTINEZ ESPINOSA D; TROTTA M; LLOYD R; SZTEJNBERG M; GALLINO J; NEVARES N; ZAPATA A; SANMARCO E; CRUDO JL; CERDA MB; LOPEZ BULARTE C; GIANNONI F; PODHAJCER O; POLICASTRO L

Buenos Aires

Encuentro; XIX Encuentro de Superficies y Materiales Nanoestructurados,; 2019

Instituto de Nanociencias y Nanotecnologia CNEA-CONICET

En la radioinmunoterapia (RIT) se utilizan anticuerpos monoclonales contra antígenos asociados a células tumorales marcados con radionucleídos. Los VHH son fracciones de inmunoglobulinas derivadas de camélidos que poseen menor tamaño e inmunogenicidad respecto a los anticuerpos monoclonales así como también un menor costo de producción. Estas características los vuelven atractivos para el diseño de radioinmunofármacos (RIF). En particular, el receptor de crecimiento epidérmico (EGFR) está sobreexpresado en varios tipos de tumores, por lo cual es un antígeno atractivo para utilizar en RIT. El Lutecio-177 (177Lu) tiene una vida media de 6,7 días y una emisión de energía beta negativa máxima es de 497 KeV, por lo cual es ideal para el desarrollo de radiofármacos terapéuticos. El objetivo general de este trabajo es desarrollar un radioinmunofármaco terapéutico basado en un nanoanticuerpos de camélidos contra EGFR (VHH-EGFR) marcado con 177Lu. La secuencia del VHH fue clonada en un vector de expresión producido en un sistema bacteriano. El VHH-EGFR fue purificado y caracterizado por gel de poliacrilamida y ensayo de Elisa. El VHH-EGFR fue conjugado con pSCN Bn-DTPA, purificado y marcado con 177Lu de alta actividad específica (A.E) (177Lu-SCN-DTPA-VHH-EGFR). En primer lugar, se realizaron ensayos de unión e internalización específica utilizando líneas celulares tumorales de distinto origen. Se utilizó la línea HEK293-EGFR y la línea HEK-293 que expresa EGFR constitutivamente como control positivo y negativo respectivamente. Como control de especificidad las células tumorales fueron bloqueadas previamente con Cetuximab (Anticuerpo Monoclonal anti-EGFR) y fueron expuestas al RIF por 24 h a 37 ºC. Se midió la actividad no internalizada y la asociada a las células tumorales. Finalmente, se realizó un ensayo clonogénico, incubándose con el RIF durante 24h, a fin de evaluar la efectividad terapéutica del RIF. Para el cálculo de dosis se realizó un modelado computacional desarrollado ad hoc utilizando Código de Transporte de Partículas N de Monte Carlo (MCNP). Como resultado de este trabajo, se obtuvo un VHH contra EGFR marcado con 177Lu de alta AE (177Lu-SCN-DTPA-VHH-EGFR), con una pureza radioquímica del 99 % determinada por Cromatografía Instantánea en capa delgada (ITLC) y una AE de 4,62mCi/mg de VHH. Se obtuvieron distintas masas de unión e internalización específica en las distintas líneas celulares, siendo máximo en la línea HEK293-EGFR y mínimo en la línea HEK293 que carece expresión del EGFR. Finalmente se observó actividad citotóxica significativa en las líneas tumorales evaluadas. En conclusión, se logró obtener un radioinmunofármaco capaz de unirse específicamente a células tumorales EGFR (+) de distintos orígenes y que muestra actividad terapéutica significativa.