Caracterización cinética de la mutante W106A de la ADP-glucosa pirofosforilasa de Agrobacterium tumefaciens

FIGUEROA CM; IGLESIAS AA

Santa Fe

Encuentro; VII Encuentro de Jóvenes Investigadores de la UNL; 2003

UNL

La estructura tridimensional de la ADPGlc PPasa aún no ha sido resuelta por cristalografía de rayos X, por lo que han sido realizados diferentes estudios estructurales utilizando otras técnicas para establecer relaciones de estructura-función. Estudios de modificación química y mutagénesis sitio-dirigida han identificado el rol fundamental de ciertos residuos aminoacídicos involucrados en la unión de los sustratos, catálisis o regulación principalmente de la enzima de Escherichia coli. Utilizando análogos de fotoafinidad del ATP y de la ADPGlc fue posible identificar la Tyr114 como involucrada en la unión del sustrato nucleotídico. La mutagénesis del residuo Lys195 produjo enzimas con una afinidad drásticamente disminuida hacia la Glc1P. El rol esencial del Asp142 para la catálisis fue recientemente demostrado. Todos estos datos concuerdan con la hipótesis de que la actividad de la ADPGlc PPasa es ejercida por un dominio localizado en la región central de la proteína, con los extremos N- y C-terminales involucrados en la regulación de la enzima. En el presente trabajo se construyó y caracterizó una enzima mutante de Agobacterium tumefaciens (W106A), para obtener información sobre las características de la función de los residuos adyacentes a la Tyr107 (equivalente a la Tyr114 en E. coli) identificada como involucrada en la unión de ATP y ADPGlc a la enzima.