Modulación de Ascl1 como estrategia terapéutica de diferenciación en neuroblastoma

FEDERICO JULIÁN GARDE; MARÍA JIMENA MOSNA; LUCÍA PAULA PETRIZ OTAÑO; MARCELO GABRIEL STINSON; DANIELA DI BELLA; ABEL LUIS CARCAGNO

Buenos Aires

Jornada; 22. XXXV Jornadas Multidisciplinarias de Oncología del Instituto ?Ángel H. Roffo?; 2022

Instituto ?Ángel H. Roffo?

El neuroblastoma es el cáncer pediátrico más común derivado del linajesimpatoadrenal que, con frecuencia, se origina en las glándulas adrenales. Esun tumor derivado de células de la cresta neural que presentan alteraciones enel proceso de diferenciación a células de los ganglios simpáticos maduros océlulas cromafines.Ascl1 es un factor de transcripción proneural, cuya expresión en el linajesimpatoadrenal es temprana y transitoria. En células tumorales deneuroblastoma Ascl1 sigue activo y su alta expresión está asociada a un peorpronóstico clínico.Los objetivos del trabajo fueron a) Evaluar el efecto del knockdown (KD) deAscl1 en el fenotipo de células de neuroblastoma y b) Analizar datos descRNAseq de tumores de neuroblastoma con el fin de comprender laheterogeneidad celular y evaluar a Ascl1 como potencial blanco terapéutico.Para los estudios de pérdida de función de Ascl1, se transfectó la línea celularde neuroblastoma SK-N-SH con shRNA contra Ascl1 y shRNA Scramble.Adicionalmente se analizaron datos públicos de scRNAseq de tumores depacientes con neuroblastoma utilizando el software R versión 4.0.4.Los resultados obtenidos indican que el KD de Ascl1 induce la diferenciaciónde células de neuroblastoma, observándose diferencias destacables en lamorfología entre las células con shAscl1 o shScramble. Este cambiomorfológico consiste en un alargamiento en las células shAscl1, adquiriendo unfenotipo similar al neuronal. Además, se observó mediante ensayos deproliferación que el KD de Ascl1 es capaz de inhibir la capacidad proliferativade estas células.Los análisis de scRNAseq mostraron que la heterogeneidad de los tiposcelulares presentes en los tumores de neuroblastoma no está dada por suorigen. Por similitud transcriptómica se observó que todas las células tumoralesprovienen de los simpatoblastos de la medula adrenal. La heterogeneidadcelular puede explicarse a partir de la fase del ciclo celular en la que seencuentran las células tumorales. Por otro lado, Ascl1 se expresa en todos lostipos celulares y en conjunto a genes vinculados a la neurogénesis.Estos resultados permiten concluir que: i) La inhibición de Ascl1 afecta lascaracterísticas tumorigénicas, ii) La heterogeneidad celular del neuroblastomaestá dada por el ciclo celular y no el origen celular, iii) Ascl1 no tiene un efectodirecto sobre la tumorigenicidad, sino que contribuiría al bloqueo de ladiferenciación neuronal terminal.