EXPRESIÓN ECTÓPICA DE E2F INDUCE LA EXPRESIÓN DE P19INK4D, INHIBIDOR ESPECÍFICO DE CDK4/6, EN TODAS LAS FASES DEL CICLO CELULAR

CARCAGNO, ABEL; SCASSA, MARÍA; CERUTI, JULIETA; CÁNEPA, EDUARDO

Mar del Plata, Argentina

Congreso; Congreso conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

Sociedades Biomédicas (SAIC, SAI, SAFE,SAB,SAN,SAF)

La proteína p19 es uno de los cuatro miembros de la familia de inhibidores de CDK4/6 denominada INK4. Hipótesis recientes postulan que cada uno de ellos estaría involucrado en diferentes funciones celulares debido, en parte, a diferencias en la regulación transcripcional manifestándose en una expresión específica ante diversos estímulos. Si bien la regulación de p16 y p15 ha sido caracterizada, la de p18 y p19 no ha sido aún dilucidada. Llamativamente, p19 presenta una expresión periódica a lo largo del ciclo celular. El objetivo consiste en estudiar la regulación de la expresión de p19 y determinar las causas de su periodicidad. El sistema utilizado consistió en cultivos de fibroblastos BHK21, cuyo ciclo, determinado por FACS, tiene una duración de 18-20 h. Mediante ensayos de northern y western, se confirmó la periodicidad de p19 con una ventana de expresión entre G1 medio y final de S. Las células fueron transfectadas con vectores que expresan los factores E2F (1 a 6). La sobrexpresión de E2F1, 2 y 3 produjo un aumento del mRNA de p19, mientras que las isoformas E2F4, 5 y 6 no tuvieron efecto. Cuando las células fueron sincronizadas y arrestadas en las distintas fases del ciclo, la sobrexpresión de E2F1 incrementó la transcripción de p19 aún en aquellas fases del ciclo donde normalmente no se expresa (G2 y M) y en quiescencia (G0). El análisis in silico del promotor de p19 muestra sitios de unión potenciales para varios factores de transcripción, entre ellos 4 sitios para E2F. Oligonucleótidos (dON) para estos 4 sitios fueron utilizados en ensayos de EMSA con extractos nucleares de BHK. Dos de ellos formaron un complejo DNA-proteína idéntico al formado con un dON conteniendo el sitio consenso para E2F. Estos complejos resultaron mutuamente competidos con exceso de dON frío. Los resultados presentados demuestran la participación de E2F en la regulación del gen de p19INK4d y sugieren que la disponibilidad de estos factores podría determinar la periodicidad de su expresión.