Medición de movimientos de agua en oocitos vaciados de Xenopus laevis

OZU MARCELO; DORR RICARDO; PARISI MARIO

Mar del Plata, Argentina

Congreso; I Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

SAIC - SAI - SAFE - SAN - SABiología - SABiofísica - SAF

Descripción de una nueva técnica para medir movimientos de agua en ovocitos vaciados de Xenopus laevis. Marcelo Ozu, Ricardo Dorr y Mario Parisi. Laboratorio de Biomembranas, Facultad de Medicina (UBA) Una técnica muy utilizada para estudiar funcionalmente proteínas es la inyección de material genético en ovocitos maduros de Xenopus laevis para lograr su expresión. Esta técnica, asociada a la videomicroscopía,  se usa también para caracterizar los movimientos de agua a través de las acuaporinas (proteínas que funcionan como canales de agua). Una limitación de la metodología tradicional es que no puede controlarse el contenido citoplasmático del ovocito. En nuestro laboratorio desarrollamos una nueva técnica donde un ovocito se pega a una lámina de acrílico y se perfora, permitiendo el vaciamiento del contenido celular y la perfusión controlada. Utilizando una cámara del tipo Ussing diseñada especialmente se pudieron seguir los movimientos de agua a través de la membrana plasmática de los ovocitos, cuantificando los cambios de posición de la misma. La técnica implica la adquisición de imágenes (hasta 15 por segundo) y su análisis utilizando algoritmos de detección de bordes. Se compararon ovocitos inmaduros (estadio IV) y maduros (estadios V y VI). Se describen las características de la técnica y los controles colorimétricos y de medición de parámetros eléctricos que se realizaron.