Estudios biofísicos de permeabilidad al agua controlando el medio en ambos lados de la membrana celular de ovocitos de Xenopus laevis

MARCELO OZU; RICARDO DORR; MARIO PARISI

Buenos Aires, Argentina

Congreso; XXII Latin-American and First Ibero-American Congreso of Physiological Sciences; 2006

Asociación Latinoamericana de Ciencias Fisiológicas, Sociedad Argentina de Fisiología, Sociedad Española de Ciencias Fisiológicas

Estudios biofísicos de permeabilidad al agua controlando el medio en ambos lados de la membrana celular de ovocitos de Xenopus laevis. Marcelo Ozu1,2, Ricardo Dorr1 y Mario Parisi2, (1) Lab. de Biomembranas, Dpto. de Fisiología, Fac. Medicina (UBA), y (2) Unidad de Biomembranas, Universidad Favaloro, República Argentina.   Los ovocitos de Xenopus laevis son idóneos para estudiar propiedades de proteínas foráneas expresadas en ellos, como es el caso de los canales de agua (acuaporinas). La permeabilidad al agua se calcula a partir de los cambios de volumen de los ovocitos, que ocurren al someterlos a cambios osmóticos por modificación del medio extracelular. Una limitación de esta técnica es la imposibilidad de acceder al medio interno de la célula, para controlarlo y modificarlo. Esta restricción logró superarse en nuestro laboratorio mediante el desarrollo de una técnica que permite pegar un ovocito sobre una placa de acrílico perforada y, luego, mediante microperfusión, reemplazar total o parcialmente el medio intracelular. La membrana celular queda así separando dos cámaras independientes, una de ellas hermética. Cualquier pasaje neto de fluido a través de la membrana provoca su desplazamiento, lo que permite medir la permeabilidad al agua mediante videomicroscopía. Se incrementó la presión hidrostática del lado intracelular en ovocitos maduros e inmaduros, comprobándose que el cambio de volumen relativo máximo que pueden tolerar antes de su ruptura es similar. Sin embargo, el coeficiente de permeabilidad osmótica Pf (10-3 cm/s) en los ovocitos maduros (1.72±0.58, n=6) fue significativamente menor que en los inmaduros (5.18±0.59, n=5; p<0.005). También se midieron movimientos de agua en ovocitos que expresan acuaporina-1 (AQP-1), y el Pf en ellos fue significativamente mayor que en ovocitos inyectados con agua (41.22 ± 5.96, n=7 vs 4.05 ± 0.47, n=3; p<0.001). Además se estudió el efecto del inhibidor HgCl2, aplicado en forma selectiva en ambos lados de la membrana, demostrándose una asimetría en respuesta a su presencia.