Bidireccionalidad del transporte de agua a través de acuaporina 1

OZU, MARCELO; DORR, RICARDO; PARISI, MARIO; TORIANO, ROXANA

La Plata, Prov. de Buenos Aires

Congreso; XXXVII Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Biofisica; 2008

Sociedad Argentina de Biofísica

La utilización de una técnica desarrollada en nuestro laboratorio —que permite vaciar el contenido citoplasmático en un ovocito de Xenopus laevis y controlar las propiedades del medio intracelular (emptied-out oocyte)—, nos permitió abordar —desde una perspectiva diferente a la clásica— el estudio de la acuaporina 1 (AQP1) expresada en la membrana plasmática. El poder controlar las composiciones de los medios que bañan las caras extracelular e intracelular de la proteína, posibilitó ensayar la bidireccionalidad de este canal de agua. La aproximación experimental implica: a) la fijación, en una cámara especialmente diseñada, de un ovocito que ha sido previamente inyectado con el ARNm de AQP1 24 horas antes; b) el vaciado citoplasmático del ovocito por perfusión controlada con la solución de interés y c) la medición, mediante videomicroscopía, de los cambios de volumen del ovocito frente a distintas condiciones experimentales. Los ovocitos vaciados se perfundieron en el compartimiento intracelular con solución Barth + manitol (soluto impermeable a la membrana), utilizándose para el compartimiento externo la misma solución (condición ISO). Luego de la estabilización del sistema en estas condiciones se establecieron gradientes osmóticos por reemplazo del medio extracelular utilizando soluciones con cantidades controladas de manitol, generando gradientes hipo- o hiper-osmóticos. Los experimentos con gradientes de 50 mM de manitol, en protocolos Hipo-Hiper llevados a cabo en los mismos ovocitos (datos pareados) o en ovocitos independientes (datos no pareados) demuestran la bidireccionalidad del canal con una respuesta temporal completamente simétrica y valores de permeabilidad osmótica del orden de 10-2 cm.s-1. Los resultados obtenidos en diferentes condiciones de hipo- e hiper-tonicidad prueban, por primera vez en un sistema totalmente controlado, la bidireccionalidad del transporte de agua a través de la AQP1 y permiten además abordar el estudio de la posible rectificación de este canal. Este trabajo fue financiado por subsidios de Universidad Nacional de Buenos Aires, Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET) y PICT 2005 Nº 32988 (FONCYT).