Evaluación toxicológica de estrógenos ambientales en cultivo de órgano entero: bisfenol A y ensamblado folicular en ovarios de rata.

SANTAMARIA, CG; ABUD, J.; DURANDO, M; JACOB, A; MUÑOZ-DE-TORO, M.; LUQUE, E.H.; RODRIGUEZ H.A.

Simposio; V Simposio Latinoamericano de Tecnología de Cultivos Celulares (VSLATCC); 2012

Durante el desarrollo fetal de la rata, en el ovario los ovocitos se disponen en clusters denominados nidos o quistes de células germinales. Al nacimiento se produce la ruptura de estos nidos y los ovocitos se rodean de células de la granulosa para formar los folículos primordiales, los que constituyen el pool de gametas disponibles en una hembra durante toda su vida reproductiva. Las hormonas esteroides juegan un rol importante en la ruptura de los nidos: los altos niveles de estradiol (E2) en el ovario fetal mantiene los oocitos en los quistes y la caída de los niveles de E2 al nacimiento causa la ruptura de los mismos. El Bisfenol A (BPA) es un contaminante ambiental con actividad estrogénica. Nuestro objetivo fue evaluar si el cultivo de óvarios enteros es una herramienta metodológica adecuada para detectar actividad estrogénica de contaminantes ambientales. Para ello, estudiamos si el BPA es capaz de inhibir la ruptura de los nidos y el posterior ensamblado folicular en cultivos de ovarios enteros. Para ello, se extrajeron los ovarios de crías de ratas Wistar al momento del parto (DPN0: día posnatal cero) y se cultivaron sobre filtros estériles para placas de 6 pocillos (Millicell®-CM Low Height Culture Plate Inserts) durante 7 días. Los ovarios fueron expuestos a los siguientes grupos experimentales: Vehículo: medio base + DMSO 0,001%; E1: medio base + Estradiol 10-4M (control positivo); BPA: medio base + BPA 10-4M. En DPN7 fueron fijados procesados e incluidos en parafina para evaluar el % de ovocitos no ensamblados por inmunofluorescencia para VASA (proteína especifica para células germinales). Los ovarios expuestos in vitro a E1 o BPA mostraron un mayor % de ovocitos no ensamblados en folículos primordiales. Estos resultados nos permiten concluir que el BPA actuaría de manera similar a E2, siendo capaz de inhibir la ruptura de los nidos de células germinales y el posterior ensamblado folicular en cultivos de ovarios enteros.