Análisis de pFR260, un nuevo megaplásmido presente en el genoma de Bacillus thuringiensis INTA Fr7-4

AMIGO N; ZHANG, QI; AMADIO A; ZHANG, QUNJIE; SILVA, WANDERSON M.; CUI, BAIYUAN; CHEN, ZHONGJIAN; LARZABAL, MARIANO; BEI, JINLONG; CATALDI AA

Rosario

Conferencia; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología; 2016

ALAM, AAM

Escherichia coli O157:H7 es causante de diarrea severa y síndrome urémico hemolítico (SUH), el cual afecta principalmente a menores de 5 años; siendo Argentina el país de mayor incidencia del mundo. El ganado bovino es su principal reservorio y fuente de infección. Sus mayores atributos de virulencia son la toxina Shiga y el Sistema de Secreción de tipo III, a través del cual la bacteria trasloca proteínas efectoras. A partir del genotipado de Polimorfismos de Nucleótido Simple (SNPs), aislamientos de E. coli O157:H7 fueron agrupados en nueve clados distintos. Las cepas de clado 8 y clado 6 fueron más frecuentemente asociadas con enfermedad severa y SUH. Se ha observado una predominancia de cepas de clado 8 y clado 6 en el ganado de diferentes provincias de Argentina.En este trabajo, nuestro propósito fue identificar proteínas diferencialmente expresadas en dos cepas de E. coli O157:H7 con fenotipo de hipervirulencia, clado 8 y clado 6, aisladas de ganado bovino argentino; comparadas con la cepa estándar EDL933 (clado 3).Fueron preparados sobrenadante de cultivo y extracto celular de las cepas clado 8 (Rafaela II), clado 6 (7.1 Anguil) y EDL933. Las proteínas fueron extraídas y analizadas utilizando la estrategia iTRAQ labelling-TMT6plex, asociada a cromatografía liquida de dos dimensiones y espectrometría de masas (MS) en tándem. El software Mascot  fue utilizado para la identificación de los datos MS/MS y el software Scaffold para determinar proteínas diferencialmente expresadas. Se identificaron 2328 proteínas en común en el extracto celular y 1696 en el sobrenadante. El análisis posterior se enfocó en proteínas sobreexpresadas, posiblemente relacionadas con la virulencia. Tanto para el clado 8 como para el clado 6 se identificaron como sobreexpresadas familias de proteínas relacionadas, así como también proteínas individuales. Entre ellas proteínas de fagos, las subunidades de toxina Shiga, proteínas relacionadas a la quimiotaxis, y la síntesis del flagelo, un componente del Curli, un activador transcripcional, una serin-protein-kinasa, un inhibidor de lisozima, la proteasa TagA, una enzima dienelactona hidrolasa, y la Hemolisina A (HlyA). Todas estas proteínas fueron de 4 a 16 veces más abundantes en clado 8 y clado 6 que en EDL933, aunque con diferentes niveles de sobreexpresión dependiendo del clado. Éstas fueron analizadas por PCR cuantitativa en tiempo real (RT-qPCR). Los resultados obtenidos corroboran los datos proteómicos para 10 genes sobre 13 ensayados. Estos resultados muestran proteínas sobreexpresadas, en especial aquellas asociadas a fagos característicos de E. coli O157:H7, en cepas de clado 8 y clado 6. Esto alerta sobre el rol del ganado como fuente de infecciones severas por Escherichia coli O157:H7 en humanos.