Construcción de un antígeno quimérico destinado al diagnóstico serológico de la enfermedad de Chagas, utilizando bioelectrodos amperométricos

CAMUSSONE C; AMADIO A; LAGIER C; MARCIPAR I

Mendoza

Congreso; VII Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2005

En este trabajo se propone utilizar varios determinantes antigénicos reunidos en una misma molécula recombinante para la determinación de anticuerpos anti-Trypanosoma cruzi en suero humano. La estrategia escogida permite el pegado equilibrado del antígeno a la fase sólida, lo cual facilita la estandarización en la producción de los reactivos inmunoquímicos y permite alcanzar la sensibilidad de la serología convencional, según trabajos previos. Este enfoque es especialmente atractivo para el armado de bioelectrodos, ya que su estandarización resulta más compleja que la de los inmunoensayos colorimétricos. Para alcanzar el objetivo, obtuvimos una proteína quimérica mediante la expresión en tandem de péptidos altamente antigénicos. Con las secuencias codificantes para los antígenos FRA y SAPA y para una proteína quimérica recombinante constituída por los péptidos TcP2bN-t y la TcC-Ct, previamente obtenida y evaluada en nuestro laboratorio, se realizaron construcciones en el vector de expresión pET32a, obteniéndose las proteínas recombinantes FRA-SAPA, P2bNt-TcC-Ct, FRA-SAPA- P2BNt-TcC-Ct. Los productos de expresión fueron evaluados por ELISA frente a un panel de 25 sueros reactivos y 25 no reactivos. El mejor desempeño se obtuvo para la construcción FRA-SAPA. Posteriormente, se amplió la evaluación de dicha proteína con un nuevo panel de 30 sueros reactivos, 30 no reactivos, 8 sueros VDRL reactivos, 19 sueros con anticuerpos específicos anti-T. Gondii, 19 sueros de pacientes con Lupus Eritematoso Sistémico, 7 con Artritis Reumatoidea y 15 con Leishmaniasis. La construcción presentó una sensibilidad y especificidad del 100% frente a todos los sueros evaluados.