CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

La quimosina es una enzima proteolítica de peso molecular de 35 kDa aproximadamente que se utiliza en la elaboración de quesos ya que las micelas de caseína pueden coagular por acción de la misma. La quimosina se ha obtenido originariamente del abomaso de terneros jóvenes. En los últimos años, la biotecnología ha posibilitado su reemplazo por variantes recombinantes de la misma, es decir, se ha clonado el gen de la quimosina en microorganismos y éstos se han utilizado para su producción. El objetivo general de este trabajo es obtener un sistema de producción de quimosina recombinante que permita ensayar y cuantificar su actividad, con miras futuras de realizar un mejoramiento en la actividad de la misma mediante técnicas de biología molecular. El objetivo específico del presente trabajo es expresar en forma soluble y activa quimosina de camello recombinante. El gen utilizado es el de la quimosina de camello, la cual ha mostrado una mejor performance de formación de cuajo, con una proteólisis menor. Para contar con la secuencia genética completa, el gen de quimosina de camello se sintetizó por completo y se clonó en el sistema de expresión pJexpress404 es cual es un sistema inducible por isopropil-ß-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG). Para mejorar la expresión en E. coli, se realizó una optimización del uso de codones, es decir, se modificó la secuencia de ácido desoxirribonucleico (ADN) para que codifique la misma proteína, pero usa codones que son más frecuentes en E. coli. A su vez, se le agregó un tagde histidinas para posibilitar su purificación por cromatografía de afinidad. El sistema de expresión correspondiente a E. coli permite la expresión de la enzima recombinante en grandes cantidades, pero esta sobreexpresión conlleva a la formación de cuerpos de inclusión que contienen casi exclusivamente la enzima recombinante.

enviar mensaje