Un anticuerpo recombinante quimérico que protege contra la infección con virus Junín.

CORDO; S; JAMIELITY S; MARTINEZ M. G; ABRAHAM J; RODRÍGUEZ J. A; BERNABEU E; MAFFIA P; PENICHET M. L; CANDURRA N; CHOE H; HELGUERA G

Congreso; Congreso Argentino de Virologia; 2011

La Fiebre Hemorrágica Argentina (FHA) es una grave enfermedad causada por el virus Junín (JUNV, familia Arenaviridae). Debido a la alta tasa de mortalidad de la FHA, JUNV se clasifica como agente patógeno de prioridad categoría A según el NIAID. En la actualidad el mejor tratamiento consiste en la inmunoterapia pasiva con el plasma de pacientes convalecientes, que reduce la mortalidad del 25-30% al 1%. Sin embargo, el mantenimiento de un stock suficiente de plasma inmune es difícil y los tratamientos con plasma plantean el riesgo de enfermedades transmitidas por transfusión, reacciones anafilácticas y aloinmunización, por lo que nuevas formas de tratamiento contra la FHA siguen siendo necesarias. La entrada de JUNV a las células del paciente ocurre vía endocitosis mediada por el receptor de transferrina 1 humano (hTfR1). El virus expresa en su superficie una glicoproteína (GP1) que se une específicamente al dominio extracelular del TfR1. Por ello, hipotetizamos que es posible neutralizar la infección por JUNV mediante un anticuerpo monoclonal (AcM) terapéutico contra hTfR1 que compita por el mismo dominio al que se une la GP1 de JUNV sobre el receptor. Tenemos disponible el AcM recombinante quimérico ch128.1, que consta de la región constante de IgG3 humana y de la región variable del AcM murino 128.1 específico contra el dominio extracelular del TfR1 humano. En estos estudios se logró determinar por resonancia plasmónica de superficie con Biacore que ch128.1 se une con alta afinidad al dominio extracelular de hTfR1 (Kd=5.65x10-9 M). Usando constructos quiméricos de TfR1 humano y de ratón se identificó el dominio de unión de ch128.1 en la región apical de hTfR1. Posteriormente, estudios con citometría de flujo permitieron observar que la incubación de la línea celular HEK293T en presencia de 50 nM ch128.1 lograba bloquear cerca de 90% de la entrada de un retrovirus que expresa GFP y pesudotipado con las proteínas de superficie de JUNV, pero no con las proteínas de superficie de virus Lassa. Por otro lado, se realizaron ensayos de infectividad in vitro usando como células huésped TRVb-1 que expresan hTfR1 y mediante titulación por el método de unidades formadoras de placas en monocapas de células Vero. Por este método se observó que co-incubación de 200 nM ch128.1 con una cepa atenuada de JUNV previene significativamente la infección por el virus en TRVb-1, comparado con el control sin AcM o con un AcM inespecífico. Es importante notar que se observó una actividad similar usando como células hospedantes PBMCs de donantes sanos. Estos estudios sugieren que es posible neutralizar la infección por este virus mediante el uso de un AcM que compita por su mismo sitio de unión en el receptor que les da entrada. La ventaja de esta estrategia es que tiene el potencial de proporcionar también una protección cruzada contra virus de otras fiebres hemorrágicas sudamericanas que usan como vía de ingreso hTfR1, tales como Machupo, Guanarito, Sabiá y Chapere.