Modulación de la Síntesis de NO en Semillas Sometidas a Condiciones de Estrés

SIMONTACCHI M; JASIS S; ROBELLO E; PUNTARULO S

Santa Rosa

Congreso; XXV Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2004

El óxido nítrico (NO) en plantas esta implicado en numerosos procesos relacionados con el desarrollo y el crecimiento (Wojtaszek, 2000). Si bien recientemente se han identificado enzimas responsables de la síntesis de NO, parecen existir múltiples vías para la generación de NO (Wedehenne, 2003). El objetivo del presente trabajo fue caracterizar la generación de NO en semillas de sorgo (Sorghum bicolor) controles y sometidas a condiciones de estrés oxidativo (paraquat y exceso de hierro). Estudios previos indican que durante el proceso de germinación existe una generación de NO en ejes embrionarios de sorgo que es dependiente del tiempo de imbibición de las semillas y que presenta un máximo entre las 24 y 30 h. Se utilizó EPR (resonancia paramagnética electrónica) para evaluar la generación de NO en homogeneizados de ejes embrionarios de sorgo suplementados  con metil glucamina ditiocarbamato-Fe2+ (MGD-Fe2+) empleado como spin trap.Los homogeneizados de ejes embrionarios de sorgo fueron incubados en presencia de NO2- NADH , sustratos de la enzima nitrato reductasa (NR). A partir de los valores obtenidos en la doble integración de las áreas de los espectros de EPR, fue posible estimar las velocidades de generación de NO dependientes de la actividad de NR in vitro (18 ± 3 nmol min-1 g PF-1) para los ejes de sorgo control). Se analizó la generación de NO cuando los homogeneizados de ejes embrionarios de sorgo fueron incubados en presencia de L-Arg y NADPH, sustratos para la enzimas óxido nítrico sintasas (NOS-like) (2,2 ±0,3 nmol min-1 g-1 PF), para homogeneizados control).Los ejes embrionarios de sorgo presentaron un contenido de NO DE 8,0 ± 0,8 nmol g-1 PF a las 24 h de imbibición de las semillas. La exposición de las semillas durante 24 h a una concentración de 4 mM de paraquat (metil viológeno) condujo a un 87% de incremento en el contenido de NO en los ejes embrionarios (15 ± 1 nmol g-1 PF). Mientras que la incubación de las semillas en presencia de un exceso de hierro (500 uM Fe-EDTA) produjo una disminución del 30% en NO de los ejes embrionarios (5,6 ± 0,6 nmol g-1 PF). A partir de los resultados obtenidos es posible postular que en ejes embrionarios de sorgo existe una generación de NO dependiente al menos de dos actividades enzimáticas, NR y NOS-like. El contenido de NO en los ejes embrionarios resultó afectado por el establecimiento de situaciones de estrés oxidativo (exposición a paraquat y exceso de hierro). Es de interés dilucidar la contribución de las distintas vías de generación de NO frente a situación de estrés oxidativo a fin de analizar cuales son los mecanismos de regulación de la síntesis de NO en distintos estados de desarrollo o situaciones de la planta.