EFECTO DEL AGREGADO DE DISTINTAS CONCENTRACIONES DE EDTA A DILUYENTES DE EQUINO A BASE DE LECHE DESCREMADA RESULTADOS PRELIMINARES

PLAZA, JP; GONZALEZ DEL PINO, FJ; REMEZOVSKI, NC; APICHELA, SILVANA A.; MIRAGAYA, M

caba

Jornada; IX JORNADAS DE JÓVENES INVESTIGADORES - FUNDAVET; 2019

FUNDAVET

La refrigeración de semen es una de las estrategias reproductivas más sencillas para optimizar la utilización del eyaculado de un semental. El diluyente de Kenney, a base de leche descremada, glucosa y antibióticos es el más utilizado para la refrigeración de semen, pero su utilización para IA se limita a 24hs. Esto se debe a cambios que se producen a nivel celular durante el almacenamiento, principalmente en la permeabilidad de la membranaplasmática a distintos iones. El Ca++ está relacionado con eventos como la capacitación y la reacción acrosomal y el desencadenamiento prematuro de estos eventos deja sin capacidad fecundante al espermatozoide. Se ha observado que las altas concentraciones de calcio presentes en los medios a base de leche favorecen la capacitación espermática prematura.El objetivo de este ensayo fue evaluar la respuesta de los espermatozoides a la refrigeración prolongada (72hs) utilizando Kenney con el agregado de un agente quelante, el ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), en cuatro concentraciones: Kc (Kenney control); K1,5 (Kenney+1,5mM EDTA); K2,5 (Kenney+2,5mM EDTA); K3,5 (Kenney+3,5mM EDTA) y K4,5 (Kenney+4,5mM EDTA). Se utilizaron 2 padrillos de Raza Criolla, fértiles y 3 eyaculados de cada animal. Se filtraron, diluyeron (50x106 espermatozoides/ml) y evaluaron macro y microscópicamente. Se utilizó un Sistema de Análisis Computarizado, (AndroVision®, Minitüb) y se evaluaron los siguientes parámetros: Motilidad Total, y Progresiva, VSL (Velocidad Lineal), VCL (Velocidad Curvilínea), VAP (Velocidad promedio), BCF (Frecuencia de batido del flagelo), ALH (Desplazamiento lateral de la cabeza), STR (Rectitud) y LIN (Linealidad), también se evaluó la funcionalidad de la membrana plasmática y la presencia o no de acrosoma (Técnica combinada de HOSCoomasie Blue). Las muestras se refrigeraron utilizando un Equitainer (Hamilton Thorn) durante las primeras 24 h, luego fueron transferidas a una heladera a 5°C, donde se mantuvieron durante el resto del experimento. Las mismas pruebas realizadas fueron repetidas a las 24, 48 y 72hs pos-refrigeración. Los valores promedio de movilidad progresiva en cada padrillo a tiempo 0 y 48 hs fueron: en el control 57,46%-61,07% (0hs),35,50%-47,63% (48hs); en K1,5 63,89%-67,43% (0hs), 35,85%-56,5% (48hs) y en K2,5 59,65%-69,29% (0hs), 32,32%-50,66% (48hs). Asimismo, la velocidad lineal, la linealidad y la rectitud mostraron una tendencia a mantenerse más estables en medios con concentraciones bajas del quelante (K1,5 y K2,5) y los porcentajes de espermatozoides con membrana plasmática funcional y acrosoma intacto también evidenciaron una tendencia aser superiores en aquellos medios con iguales concentraciones de EDTA. El agregado de concentraciones de EDTA entre 1,5mM y 2,5mM en medio Kenney duplicó el tiempo de supervivencia de las muestras de semen refrigeradas para su uso en IA