DIFERENCIAS EN EL PERFIL ELECTROFORETICO DEL FLUIDO DEL CUERNO UTERINO DERECHO E IZQUIERDO DURANTE LA PREÑEZ DE LA ALPACA

ARGAÑARAZ, MARTÍN E; APICHELA, SILVANA A.; ZAMPINI, RENATO; VENCATO, J.; PACHECO, C; RUIZ, JAIME; MICELI, DORA C.; STELLETTA, C

Arica

Congreso; VI Congreso Mundial Camélidos Sudamericanos; 2012

INCAS, Fac Cs Vet Univ. Chile, FIA

Introducción: Los camélidos sudamericanos (CSA) domésticos se caracterizan en que más del 90 % de las preñeces se localizan en el cuerno uterino izquierdo (Fernandez-Baca y col., 1979), independientemente que el cuerpo lúteo se localice en el ovario izquierdo o derecho. En los CSA, la corta vida del cuerpo lúteo condiciona que el reconocimiento materno de la preñez (RMP) deba acontecer en una etapa muy temprana del periodo gestacional. Considerando que los embriones de alpaca se encuentran en el útero al día 15 post-servicio (ps) y que la implantación se produce alrededor del día 20 ps (Olivera y col., 2003), estos deben enviar su señal en un periodo extremadamente corto. Pensamos que el cuerno uterino izquierdo, a diferencia del cuerno derecho, brinda el ambiente óptimo para la implantación, estableciendo un diálogo materno-embrionario particular. A fin de analizar las moléculas que podrían participar del RMP en CSA, estudiamos el secretoma del fluido del cuerno uterino (FU) derecho e izquierdo de alpacas adultas. Materiales y métodos: Se evaluaron muestras de hembras no gestantes (NG, n=3), de alpacas con 30 ( 30DP, n=3) y 80 (80DP, n=3) días de preñez pertenecientes a DESCO (Arequipa, Perú) y al matadero de Huancavelica (Perú). El estado de los animales de determinó por la ausencia o presencia de embriones y por el tamaño de los mismo (Olivera y col. 2003). La recolección del FU se realizó post-morten, mediante lavado de cada cuerno uterino por separado con 4 ml de PBS. Las muestras se centrifugaron a 4°C, a máxima velocidad para eliminar detritus celulares y almacenaron a -20°C. Una alícuota del FU se empleo para realizar un análisis bioquímico estándar. Otra alícuota se purificó y concentró mediante ultrafiltración con una membrana de 50 kDa. A su vez la fracción que contiene proteínas de un peso molecular inferior a 50 kDa, se purificó y concentró por ultrafiltración con una membrana de 3 kDa. Cada una de las fracciones se separó mediante electroforesis en geles de poliacrilamida en condiciones desnaturalizantes. Los geles fueron documentados fotográficamente y los datos analizados con el programa ?GelAnalyzer2010a?. Se determinó el peso molecular y la intensidad de cada banda, el análisis estadístico se realizó con los programas ?Infostat? y ?R?. Resultados y discusión: Para los animales NG, 30DP y 80DP el análisis de los geles mostró respectivamente 24, 27 y 31 bandas proteicas para el FU derecho y, 31, 26 y 29 bandas para el FU izquierdo. Las bandas que no estaban presentes en todas las muestras analizadas o aquellas que mostraron una diferencia significativa en su densidad fueron seleccionadas para el análisis por espectrometría de masa. Así se seleccionó una banda de 28.1 kDa de la muestra NG derecho, que mostró homología con la betaglobina. También, se eligieron cuatro bandas de 47.3, 43.0, 30.3 y 27.3 kDa de la muestra 30DP izquierdo, las cuales mostraron homología con inmunoglobulina G, albumina, betaglobina y la cadena pesada de la inmunoglobulina G. Sin embargo, en ninguno de los casos los valores de homología fueron significativos. Es sugestivo que las bandas analizadas presenten cierta semejanza con moléculas del sistema inmunológico, ya que la preñez provoca cambios cuantitativos y cualitativos de dicho sistema en el útero; cambios que afectan la supervivencia fetal y los mecanismos de defensa uterinos en el post-parto. Estas modificaciones serían inducidas por señales locales provenientes del embrión así como también por las variaciones hormonales mediadas por el tracto materno o la placenta. Conclusión: Existen diferencias en el secretoma de ambos cuernos, las que podrían estar vinculadas a una mejor receptividad del cuerno izquierdo. El conocimiento de las moléculas involucradas en el diálogo materno-embrionario es de importancia para comprender la adaptación evolutiva de CSA que derivó en la implantación y gestación del conceptus en el cuerno uterino izquierdo a fin de posibilitar el potencial mejoramiento de las biotecnologías reproductivas aplicadas a esta especie. Para poder comprender estos mecanismo será necesario profundizar con los estudios. Referencias: Fernandez-Baca S, Hansel W, Saatman R, Sumar J, Novoa C. (1979). Differential luteolytic effects of right and left uterine horns in the alpaca. Biol Reprod. Apr;20(3):586-95