Regulación de ATP extracelular de Escherichia coli

N LAURI; CL ALVAREZ; S BADORREY; LD NIEVEZ; G CORRADI ; PJ SCHWARZBAUM

Buenos aires

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; 2014

Varios tipos celulares y microorganismos liberan ATP de manera no lítica al medio extracelular. La acumulación temporal de ATP extracelular (ATPe) depende del balance dinámico entre liberación de ATP y su hidrólisis extracelular por medio de ectonucleotidasas.En este trabajo se estudió la regulación de ATPe de Escherichia coli expuestas al péptido mastoparan 7 (MST7). Se utilizaron E. coli de la cepa DH5α (2 109 cél/ml). La concentración de ATPe fue evaluada por luminiscencia. Se registró de manera continua la intensidad de luz en suspensiones de bacterias con luciferina-luciferasa. La velocidad de hidrólisis de ATPe (actividad ectoATPasa) se evaluó en suspensiones de bacterias mediante la liberación de [γ32P]Pi a partir de [γ 32P]ATPe. Se realizaron mediciones en el rango nM (100-1000 nM) y en condiciones de velocidad máxima (500 μM).En ausencia de estímulo, la [ATPe] se mantuvo constante en el tiempo en 2.03 ± 0.42 nM/106 cél (N=5, n=10). La exposición a 10 µM MST7 produjo un aumento no lineal agudo a 5.83 ± 0.66 nM/106 cél (N=5, 5=10), resultando una tasa de liberación de ATP de 0.15 pmol/106 cél/min.La actividad ectoATPasa fue 2.6 10-5 pmol/106cél/min a 100 nM ATPe, 4.2 10-4 pmol/106cels/min a 1 µM ATPe (N=3, n=6) y 2.17 10-2 pmol/106cels/min a 500 μM ATPe (N=4, n=7).En conclusión, se observa una liberación de ATPe por MST7. Esta liberación es muy baja en relación al contenido de ATPi de E. coli y por lo tanto no representa un compromiso energético para la célula. Además, se observa que la actividad ectoATPasa en el rango nM es baja con respecto a la tasa de liberación de ATP. Esto significa que la regulación de ATPe está determinada mayormente por la liberación del nucleótido al medio extracelular. Con subsidios UBACYT (20020100100090), CONICET (PIP1187 y PIP 639) y ANPCyT (0151).