Modificación de la estequiometria Lípido-Proteína con el estado de activación en diferentes isoformas del transportador de Ca2+ de membrana plasmática

IRENE C. MANGIALAVORI; GERARDO CORRADI; MARÍA CANDELARIA DE LA FUENTE; DÉBORA E. RINALDI; HUGO P. ADAMO ; JUAN P. F. C. ROSSI

Congreso; Sociedad Argentina de Investigaciones Clínicas; 2010

La bomba de Calcio de Membrana Plasmática (PMCA) transporta Ca2+ contra gradiente electroquímico a partir de la hidrólisis de ATP. Se han identificado varias isoformas tejido específicas con una función y estructura diferente y que controlan la [Ca2+] celular. La isoforma 4b es mayoritaria en eritrocitos humanos y la 2b se encuentra especialmente en tejido nervioso. El principal modulador de la PMCA es la calmodulina (CaM). En la h4b provoca un cambio conformacional (desde E1I hacia E1A) que resulta en un aumento de la actividad Ca2+-ATPasa basal mientras, que la r2b es mucho más activa que la h4b pero menos sensible a la activación por CaM En este trabajo mostramos un estudio comparativo del número de lípidos en estrecho contacto con la región transmembrana (anulares) de las isoformas h4b y r2b de la PMCA sobre-expresada y purificada de Saccharomyces cerevisiae. Se incorporó un análogo fotoactivable de fosfatidilcolina ([125I]TID-PC/16) a micelas mixtas de C12E10-PC en las que se reconstituye la proteína. Después de la fotólisis, se evaluó la incorporación específica del reactivo y se determinó la estequiometría lípido:proteína en diferentes conformaciones de ambas isoformas. La estequiometría lípido-proteína fue: 19 (ausencia de Ca2+), 29 (presencia de Ca2+) y 14 (presencia de Ca2+-CaM) y, 18 (ausencia de Ca2+), 23 (presencia de Ca2+) y 17 (presencia de Ca2+-CaM) moléculas de lípidos por molécula de proteína para la h4b y la r2b, respectivamente. La titulación del cambio conformacional muestra que la afinidad por CaM es 30 veces mayor en la isoforma r2b. Estos resultados demuestran por primera vez que el número de lípidos anulares varía: (i) en función del estado conformacional y (ii) dependiendo de la isoforma de la PMCA estudiada. Con subsidios de ANPCYT, CONICET y UBA.