La castration induit des changements de l' expression et de la distribution des récepteurs dans l?épididyme chez le rat. Implications dans la sécrétion de la cathespine D

AGUILERA AC; CARVELLI L; BANNOUD N; MALOSSI AE; SOSA MA

Aguas de Sao Pedro, Sao Paulo

Conferencia; Fifth International Conference on the Epididymis; 2010

Il est bien connu que l´épithélium de l´épididyme (qui est stimulé par les hormones stéroïdiennes) est impliqué dans les processus de maturation des spermatozoïdes grâce à son activité sécrétoire. De fortes concentrations de certaines hydrolases acides ont été retrouvées dans la lumière épididymaire, un événement intriguant puisque ces enzymes devraient être localisées dans le compartiment intracellulaire. De plus, il a été confirmé que certaines enzymes sont sécrétées dans la lumière en réponse aux hormones androgéniques. Dans d´autres cellules et tissus, les hydrolases acides sont sélectivement transportés aux lysosomes via les récepteurs mannose-6-phosphate (MPRs), bien qu´une voie alternative de transport a été décrite. Dans ce travail, nous avons examiné si les MPRs (ou les voies alternatives) régulent le transport et la sécrétion des enzymes lysosomiales dans l´épididyme chez le rat, et si ces mécanismes sont altérés par des hangements de concentration d´hormones stéroïdiennes. Nous avons utilisé des rats adultes Sprague-Dawley, qui ont été castrés chirurgicalement et sacrifiés 48 heures après. La tête et la queue de l´épididyme ont été finement dilacérées et laissées durant 30 min. Le surnageant a été récupéré et le fluide a été séparé des spermatozoïdes par centrifugation. Le tissu restant a été utilisé pour les études protéiques (MPRs, pro-saposine et enzymes). L´expression des protéines a été étudiée par western blot et leur localisation a été observée par immunohistochimie. Chez les animaux castrés, nous observons que l´expression de CD-MPR (cation-dependent MPR) augmente dans la tête et la queue de l´épididyme comparés aux rats contrôles. De plus, nous observons que CD-MPR est relocalisée au niveau de la région apicale de l´épithélium chez les rats castrés. En accord avec un possible rôle de la CD-MPR dans la sécrétion des enzymes lysosomales, nous observons une augmentation de la pro-cathepsine D dans le fluide épididymaire des animaux castrés, associée à une relocalisation de l´enzyme au niveau de la région apicale de l´épithélium. Parce que le transport et la sécrétion de la pro-cathépsin D peut suivre une voie alternative dans d´autres types cellulaires, nous avons étudié l´association possible de la pro cathepsine D avec l´expression et le transport de la protéine lysosomales pro-saposine et de son récepteur sortiline dans le tissu épididymaire des rats castrés comparés aux rats contrôles. Nous mettons en évidence, pour la première fois, que la pro-cathepsine D et la pro-saposine sont complexées dans le fluide épididymaire et qu´en retour, ces complexes augmentent chez les animaux castrés. Comme avec le CD-MPR, il y a une redistribution de la pro-saposine et sortiline au niveau de la région apicale de l´épithélium à cause de la castration. Par ailleurs, nous observons une corrélation entre l´expression de la pro-saposine et son récepteur sortiline, et que les deux protéines sont augmentées dans la tête, mais diminuées dans la queue de l´épididyme chez les animaux castrés. Cependant, de manière intéressante, la castration induit une augmentation de l´expression de la pro-saposine dans les deux régions de l´épididyme. En conclusion, cette étude montre que l´expression de CD-MPR et de la sortiline pourrait être influencée par des changements hormonaux au niveau de l´épithélium épididymaire et par conséquence induire une altération du transport de certaines protéines lysosomales.