MODIFICACIONES POST-TRANSDUCCIONALES DE LA GTPASA MONOMERICA RAB11

PAVAROTTI M; COLOMBO MI; DAMIANI MT

Facultad de Ciencias Médicas. Universidad Nacional de Cuyo

Jornada; IX Jornadas de Investigación de la Secretaría de Ciencias, Tecnicas y Posgrado; 2007

Secretaría de Ciencias, Tecnicas y Posgrado

Las GTPasas monoméricas de la familia Rab son las proteínas directrices del transporte intracelular. Se han descripto más de 60 proteínas Rabs diferentes, las cuales se localizan específicamente en distintos compartimentos intracelulares y regulan una etapa determinada del tráfico vesicular. Estas GTPasas intervendrían no sólo en el reconocimiento de membranas, sino también en la formación de vesículas, reclutamiento de efectores y adquisición de competencia fusogénica. En nuestro laboratorio hemos demostrado que Rab11 regula la fagocitosis y el reciclaje desde el compartimento fagocítico. Recientemente se ha descrito una familia de efectores de esta GTPasa Rab, utilizando ensayos de interacción in vitro, el sistema del doble híbrido y coinmunoprecipitación. Esta familia de proteínas FIPs (Rab11-Family Interacting Proteins) interactúa con Rab11 por un dominio conservado presente en su extremo C-terminal llamado RBD (Rab Binding Domain). Hemos descripto que RCP (Rab Coupling Protein) uno de los miembros de la familia FIP participa en conjunto con Rab11 en la fagocitosis. En la actualidad, nos interesa conocer si Rab11 sufre algún tipo de modificación post-traduccional, lo que podría resultar en una mayor afinidad por alguno de sus efectores. Se analizó la secuencia aminoacídica de Rab11 utilizando distintas herramientas computacionales lo que permitió reconocer sitios consensos de fosforilación en la proteína. Los resultados indicaron los aminoácidos con mayor probabilidad de ser fosforilados y las posibles enzimas fosforilantes. Se han realizado ensayos experimentales de fosforilación in vitro con la proteína Rab11 recombinante purificada. Los resultados obtenidos muestran que Rab11 se fosforila post-transduccionalmente por una enzima perteneciente al grupo de quinasas Serina/Treonina basófilas. Es posible que la fosforilación de Rab11 provoque cambios en su estructura tridimensional y su carga neta, resultando en una modificación de su afinidad por alguno de los miembros de la familia de proteínas que interaccionan con ella. Este evento tendrá un gran impacto sobre el conocimiento de la regulación del tráfico intracelular.