Flujo dinámico del medio ambiente al nicho nosocomial de los plásmidos con replicación tipo ColE1.

D ALVAREZ; FALCONE-DIAS M; CECILIA RODRÍGUEZ; CHAMOSA L; NARDELLI M; PISTORIO M; PAVAN F; FUJIMURA LEITE C; QUIROGA MP; CENTRON D

Rosario, Santa Fe

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiologia. XIV Congreso Argentino de Microbiologia; 2016

AAM

Los plásmidos juegan un rol crucial en la Transferencia Lateral de Resistencia a Antibióticos (plásmidos R). Usualmente no son esenciales para su huésped, pero en el nicho nosocomial son decisivos para la supervivencia. Dentro de los plásmidos R, los tipo ColE1 poseen un alto número de copias, siendo ARNI y ARNII transcriptos a partir del oriV. Nos preguntamos cómo es el flujo genómico y ecológico de este replicón para entender su diseminación exitosa en el nicho clínico. Para ello, se investigó su relación con determinantes de resistencia a antibióticos y a otros elementos del mobiloma. Se extrajo el ADN total de 114 aislamientos pertenecientes a las familias Enterobacteriaceae y Pseudomonadaceae de la clínica (n=90) y del ambiente (n=24) (2000-2014) y se pesquisó la región de replicación ColE1 usando PCR y posterior secuenciación con ABIPrism 3100 BioAnalyzer. Trece de las 90 cepas clínicas, poseían secuencias con más del 81% de identidad con ColE1, siendo la mayoría enterobacterias (n=12) y una Pseudomonas aeruginosa. Posteriormente, las cepas positivas fueron analizadas por PCR inversa, lo cual permitió identificar 3 plásmidos pequeños de menos de 5000pb, idénticos a pPAB19-3 y a pPAB19-3 en cepas de Salmonella enterica y E. coli. Se encontraron dos cepas ambientales portadoras de secuencias relacionadas a ColE1 (Enterobacter spp. y Yersinia spp.) aisladas en Tierra del Fuego en zonas con alto y bajo nivel de urbanización, respectivamente. Luego se realizaron estudios de Bioinformática usando Genetics Computer Group y Blast, alineaciones con ClustalW y el método de Máxima Verosimilitud para filogenia usando 564pb del replicón ColE1 lo cual permitió identificar secuencias de más del 84% de identidad en cepas pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae de origen clínico de 24 países en 4 continentes (n=51) y de origen ambiental en 3 continentes (n=12).Se identificaron 3 grupos según el tamaño de los plásmidos ColE1. El primero contiene los plásmidos de más de 15.000pb (n=6), todos plásmidos R invadidos por transposones de la familia de Tn3 y derivados. El segundo grupo contiene plásmidos de entre 5000 a 15000pb siendo 7 plásmidos R (n=14). El tercer grupo corresponde a plásmidos menores de 5000pb, 23 de los cuales eran plásmidos R (n=30) y 12 poseían el gen qnrB19. Estudios filogenéticos también relacionaron 2 clusters de resistencia antibiótica que reflejan la diseminación de determinantes específicos blaCTX-M-5, y qnrB19 con plásmidos R de los grupos 2 y 3, respectivamente.El alto número de copias de este replicón aumenta la probabilidad de su diseminación en el medio ambiente y la clínica. Los estudios filogenéticos con replicones de origen ambiental y clínico, así como la asociación específica a determinados determinantes de resistencia a clusters particulares, indican que este replicón está capacitado para ?cazar? y diseminar genes del ambiente a la clínica y viceversa, incluyendo mecanismos de resistencia a antibióticos.