Confirmación genética de B-lactamasa de espectro extendido (BLEE) PER-2 y CTX-M (blaPER-2 y blaCTX-M2)

CECILIA RODRÍGUEZ; MARÍA ANGELA JURE; MARTA CECILIA; OLGA AULET

Tafí del Valle, Tucumán

Jornada; XX Jornada Científica de la Asociación de Biología de Tucumán; 2003

Asociación de Biología de Tucumán

Las beta-lactamasas de espectro extendido (BLEE) incluyen en su espectro de actividad penicilinas, la mayoría de las cefalosporinas y aztreonam, no hidrolizan cefamicinas (cefoxitina, cefotetan y moxalactam) y carbapenemes (imipenem y meropenem); son inhibidas por ácido clavulánico, tazobactam y sulbactam. Las beta-lactamasas plasmídicas PER-2 y CTX-M-2 han sido observadas en miembros de la familia Enterobacteriaceae desde 1990. En la actualidad están ampliamente diseminadas en diversas regiones geográficas; en particular CTX-M-2 fue extensamente encontrada en Argentina y en países vecinos. La amplia diseminación de estas enzimas entre patógenos humanos, que antes no albergaban BLEE, constituye un serio problema de salud. En un hospital de Tucumán se produjo un brote de diarrea por S. oraniemburg productora de beta-lactamasa de espectro extendido, en niños de 5 meses a 2 años de edad. Nuestro objetivo fue detectar por reacción de polimerasa en cadena (PCR) la presencia de los genes responsables de la producción de CTX-M-2 y PER-2, en 10 cepas seleccionadas al azar del brote de S. oraniemburg. El estudio de perfiles de resistencia a beta-lactámicos (ampicilina, amoxicilina/ácido clavulánico, cefalexina, piperacilina, cefotaxima, ceftazidima, aztreonam, cefepime y cefpodoxima) con resistencia acompañante a gentamicina, el agrandamiento del halo de inhibición frente a ceftazidima/clavulánico, cefotaxima/clavulánico y la determinación del punto isoeléctrico (pl) por inmunoelectroenfoque (IEF) sugirieron la presencia de enzimas BLEE tipo CTX-M-2 y PER-2 en las cepas seleccionadas. La detección de los genes que codifican para estas enzimas se realizó por PCR utilizando los siguientes primers: 1) bla-CTX-M2: CGGAATTCATGATGACTCAGAGCATTCG y GCTCTAGATTATTGCATCAGAAACCGTG y 2) bla-PER-2: GTAGTATCAGCCCAATCCCC y CCAATAAAGGCCGTCCATCA, con productos de amplificación de 896 y 740 pb, respectivamente. Como control de extracción de ADN se utilizaron los primers DG74 RW01, que amplificaron regiones altamente conservadas del ADN 16S presente en la mayoría de las bacterias patógenas. Como control positivo se utilizó una cepa de K. pneumoniae productora de CTX-M-2 y PER-2 (provista por Instituto Malbrán). Los productos de amplificación se visualizaron en geles de agarosa observándose bandas de 896 pb para CTX-M-2 y 740 pb para PER-2. Los productos de amplificación obtenidos por PCR confirmaron la presencia de BLEE CTX-M-2 y PER-2 en las cepas de S. oraniemburg estudiadas. El análisis de los resultados permitió implementar la terapéutica correcta para evitar la diseminación de estos genes de resistencia a otras bacterias.