Hipoxia/Reoxigenación induce daño nitrosativo y oxidativo en el sincisiotrofoblasto de placenta humana

DI PAOLA, MAURICIO ; SZPILBARG, NATALIA; SIERRA, MATÍAS; N ANUD, CAROLINA; MASKIN, BERNARDO; MARTÍNEZ, NORA; CASTRO PARODI, MAURICIO ; DAMIANO, ALICIA E

La Plata

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; 2016

Las placentas preeclámpticas se caracterizan por una placentación defectuosa, que lleva a un ambiente placentario relativamente hipóxico, provocando un daño del tipo isquemia-reperfusión sobre el trofoblasto, afectando sus funciones de síntesis y transporte. Estas fluctuaciones en la concentración de oxígeno generan diferentes especies reactivas del oxígeno (ROS) y del nitrógeno (RNS), que promoverían la formación de peroxinitritos. Éstos producen daños sobre los lípidos, el DNA y las proteínas. En estudios previos observamos en placentas preeclámticas, que la expresión de acuaporina-9 (AQP9) aumenta pero no es funcional. Posteriormente, en explantos de placenta normal sometidos a hipoxia seguida de reoxigenación observamos el mismo resultado, sugiriéndonos que la Hipoxia/Reoxigenación modificaría no solo la expresión, sino la función de esta proteína. Dado que el peroxinitrito puede nitrar residuos de tirosina en las proteínas llevando a una pérdida de función de las mismas, nuestra hipótesis es que la hipoxia/reoxigenación induce un aumento de ROS y RNS, que llevaría a la nitración de la AQP9, impidiendo su correcta degradación (acumulándose en el citoplasma) y haciéndola no funcional.OBJETIVO: evaluar si la hipoxia/reoxigenación induce aumento de ROS y RNS que lleven a un aumento del perfil de proteínas nitradas, cambios en la expresión de las enzimas antioxidantes y daño celular.METODOLOGÍA: Se cultivaron explantos de placenta normal en normoxia y en normoxia seguida de reoxigenación. Se estudió la expresión de Catalasa, SOD 1 y proteínas nitradas por la técnica de Western Blot e inmunohistoquímica. Se determinó el daño celular mediante el grado de peroxidación lipídica por la técnica de TBARS. En todos los casos se estudió la expresión de AQP9.RESULTADOS: Se observó que en explantos cultivados en hipoxia/reoxigenación la expresión de catalasa aumentó significativamente, mientras que la expresión de SOD 1 disminuyó. La expresión de proteínas nitradas así como la expresión de AQP9 aumentó significativamente en estas condiciones, observando un patrón similar al reportado en placentas preeclámpticas. Por último, observamos un aumento del grado de peroxidación lipídica en estas condiciones.CONCLUSIÓN: Estos resultados sugieren que la hipoxia seguida de reoxigenación es la responsable de las alteraciones observadas en las enzimas encargadas de las defensas antioxidantes aumentando las ROS y RNS. Esto no sólo produciría daño celular sino que también induciría a un aumento de la nitración en las proteínas, como la AQP9, promoviendo la acumulación en el citosol de proteínas no funcionales.