XylCLEAs inmovilizados en nanopartículas magnéticas, diseñados a partir de proteína amiloidea

HERO JOHAN; MORALES ANDRES; PEROTTI NORA; MARTINEZ A; ROMERO CINTIA M

Encuentro; XIX Encuentro de Superficies y Materiales Nanoestructurados-Nano; 2019

La inmovilización es una manera de incrementar la vida útil de los biocatalizadorespor estabilización de los mismos y por la posibilidad de reutilización en varios ciclos. Dentrode los métodos de inmovilización, una de las técnicas atractivas por simplicidad y costo es laproducción de agregados enzimáticos entrecruzados o CLEAs (cross-linked enzymeaggregates), como enzimas inmovilizadas libres de soporte. Sin embargo, para muchossustratos insolubles la separación de estos agregados por filtración y/o centrifugación resultaineficiente, por lo tanto, la inmovilización con nanopartículas magnéticas (MNPs) resulta en unmétodo de fácil recuperación. El objetivo del presente trabajo es analizar los factores queconforman la matriz de inmovilización de enzimas del tipo glicósido-hidrolasa, en la formaciónde XylCLEAs magnéticos, con el propósito de maximizar la actividad catalítica sobre sustratosnaturales (xilano de birchwood).Se empleó el catalizador optimizado según Hero y col. [1], y se aplicó un diseñosuperficie en respuesta con los siguientes factores: relación MNPs Fe3O4 5, 10 y 20 mg por mgde proteínas presente en el sobrenadante libre de células; porcentaje de saturación del(NH4)2SO4 (60%, 80% y 100%); y el tipo de agente entrecruzante empleado en la matriz,glutaraldehído (GA) 0,025% (p/v), o un complejo de biopolímero-proteína amiloidea (BPPA)producido a partir del biofilm de Bacillus sp. Mcn4 0,025% (p/v), sometido a un tratamientooxidativo. La respuesta evaluada fue actividad xilanolítica [1].El análisis estadístico del modelo empleado resultó en un R2adj. del 97%, validando eldiseño. Todos los factores evaluados tuvieron un efecto significativo (p