Expresión de inulinasa ácida producida por Aspergillus Expresión de inulinasa ácida producida por Aspergillus kawachii en Pichia pastoris

CHESINI, M.; ROJAS N.L.; BARUQUE, D.J.; CAVALITTO, S. F.; GHIRINGHELLI, P. D

Santa Fe

Simposio; 3º Simposio Argentino de Procesos Biotecnológicos; 2014

La búsqueda de nuevas enzimas capaces de ser empleadas en procesos industriales esuna actividad constante en el área de la Biotecnología: una vez detectado el biocatalizadorcon las propiedades buscadas, éste debe ser purificado para estudiar sus propiedades másrelevantes, determinar cuáles son los factores que controlan su eficiencia y finalmenteproducirlo en cantidades necesarias para la aplicación deseada.La inulina es un polímero de reserva de origen vegetal compuesto principalmente porunidades de fructosa, unidas por enlaces β (2→1) glucosídicos y una glucosa terminal. Lasinulinasas son enzimas que hidrolizan la inulina en un solo paso con rendimientos cercanos al95% de fructosa. Estas enzimas tienen potenciales aplicaciones en la industria de losalimentos para la producción de jarabe de fructosa con alta eficiencia y sin la necesidad deetapas de purificación posteriores, como una alternativa económicamente viable a laobtención de jarabe de maíz de alta fructosa a partir de almidón. La fructosa tiene un poderedulcorante 70% mayor que la sacarosa y no causa problemas en cuanto a cariogenicidad ydiabetes. Por otra parte, las inulinasas poseen un enorme potencial para convertir residuos decosecha de alta inulina en azucares fermentables para producir etanol por medio desacarificación y fermentación microbiológica simultáneas. El bioetanol obtenido a partir deresiduos agroindustriales ricos en inulina posee varias ventajas con respecto al producidodesde fuentes tradicionales tales como caña de azúcar, remolacha o maíz: permite utilizarresiduos que podrían transformarse en problemas ambientales y no presenta el dilema éticode estar utilizando un alimento para producir energía.Sin embargo, algunos procesos industriales en los que se emplean enzimas se encuentranlimitados por la disponibilidad de masa proteica suficiente para poder llevarlos a cabo. Tal esel caso de las exo-inulinasas fúngicas, que son producidas en muy pequeñas cantidades. Unaalternativa viable es el clonado y sobre-expresión en sistemas heterólogos. El objetivo de estetrabajo fue llevar a cabo el clonado del gen de una inulinasa de Aspergillus kawachii en elsistema de expresión heterólogo de Pichia pastoris a los efectos de lograr la producción de lamisma a escalas adecuadas para su aplicación industrial.