ROL DE INHIBIDORES DE PROTEASAS DE {SALMONELLA} TYPHIMURIUM EN LA INTERACCIÓN HOSPEDADOR-PATOGENO

SAPOSNIK LUCAS; CORIA LORENA; BRUNO LAURA; PANDOLFI JULIETA; POL MELINA; MCCLELLAND MICHAEL; PASQUEVICH KARINA ALEJANDRA; CASSATARO JULIANA

CABA

Congreso; XIV Congreso Argentino de Microbiología General (XIV SAMIGE); 2019

Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOSCasi todos los agentes infecciosos (virus, bacterias, hongos y parásitos) ingresan al hospedador a través de mucosas. La mucosa intestinal es la interfaz más extensa entre el ambiente externo y los tejidos del cuerpo humano. La primera línea de defensa del tracto gastrointestinal se encuentra en el lumen intestinal, donde los microorganismos son degradados de forma no específica por el pH y secreciones gástricas, biliares y pancreáticas. Nuestra hipótesis es que Salmonella sintetiza inhibidores de proteasas no solo para regular la actividad de proteasas endógenas, usualmente asociadas a su virulencia, sino además para poder enfrentarse al sistema de defensa proteolítico del hospedador. Nuestro objetivo general es estudiar el rol de los inhibidores de proteasas de Salmonella en la interacción hospedador-patógeno en la mucosa gastrointestinal. MATERIALES Y MÉTODOSUtilizando MEROPS se realizó un análisis in silico sobre el genoma de Salmonella y se encontraron 4 familias de inhibidores de proteasas. Para el estudio in vivo de la colonización intestinal y el desarrollo de colitis se utilizó el modelo de pre-tratamiento con estreptomicina en ratones. Luego, los animales fueron infectados por vía oral con las distintas cepas de Salmonella control o delecionadas en los genes para los inhibidores de proteasas (knock-out). Se realizaron análisis histopatológicos de cortes del cecum de los ratones, teñidos con hematoxilina y eosina. También se realizaron ensayos de invasión en la línea celular de macrófagos murinos J774, así como también en macrófagos derivados de médula ósea de ratón. El análisis estadístico se realizó utilizando el programa GraphPad Prism 7.RESULTADOSLuego de la infección por vía oral de los ratones pre-tratados con estreptomicina usando la cepa salvaje (WT), el cecum de los mismos se vuelve marchito, reducido en tamaño y peso, pálido y lleno de exudado purulento. Además, lleva a cambios histopatológicos en el cecum de los ratones: edema pronunciado en la submucosa, cambios edematosos en la lámina propria, elongación de la cripta, ruptura de la estructura de la cripta, reducido número de células de Goblet, erosión epitelial y/o ulceración e infiltración pronunciada de granulocitos polimorfonucleares (PMNs) en la submucosa, lamina propria, pared epitelial, así como también transmigración de PMNs en el lumen intestinal. Mientras que se observa un fenotipo atenuado luego de la infección vía oral con las cepas de Salmonella knock-out para inhibidores de proteasas para producir reducción del tamaño y peso del cecum, y los cambios histopatológicos mencionados. Ensayos de invasión en la línea celular J774 de macrófagos murinos y en macrófagos derivados de médula ósea de ratón (BMDM) demostraron que las cepas knock-out en inhibidores de proteasas tienen una capacidad reducida para invadir respecto de la cepa WT.CONCLUSIONESEstos resultados sugieren que los inhibidores de proteasas podrían contribuir a la patogénesis de Salmonella Typhimurium y el desarrollo de colitis in vivo.