La inserción de un péptido de Omp31 al extremo N-terminal de la Lumazina sintetasa de Brucella spp. mejora su capacidad protectora

CASSATARO, J; PASQUEVICH, K; ESTEIN, S; DE LA BARRERA, S; GOLDBAUM, F; FOSSATI, C; GIAMBARTOLOMEI, G

Mar del Plata

Congreso; LII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2004

Resultados previos de nuestro laboratorio demuestran que la lumazina sintetasa (BLS) y la proteína de membrana externa Omp31 de Brucella son antígenos protectores contra la brucelosis. En el presente estudio se construyó una vacuna a ADN que codifica para una proteína quimérica de BLS donde el extremo N- terminal fue reemplazado por un péptido de 27aa de Omp31 (pCIBLSOmp31). En el modelo murino de infección, pCIBLSOmp31 indujo mayor protección contra el desafío con B. ovis y B. melitensis que la co-inoculación de los plásmidos individuales (3,14 vs. 2,20 y 1,77 vs.1,09 log de protección, respectivamente, p<0,001). La co-inoculación de BLS y Omp31 como vacunas a ADN no confirió mayor protección que la inmunización de los plásmidos individuales.Los esplenocitos de los animales inmunizados con pCI-BLSOmp31 fueron capaces de lisar específicamente a células blanco A20J que presentaban péptidos de Omp31 en el contexto de MHCI y MHCII. Si estos esplenocitos estaban depletados de células T CD8 la citotoxicidad disminuía un 70%, pero si estaban depletados de células T CD4 un 37%. Además de conferir citotoxicidad anti-Omp31 y anti-BLS, los linfocitos de animales inmunizados con pCI-BLSOmp31 fueron capaces de lisar específicamente a una línea de macrófagos infectada con B. ovis. Nuevamente las células T CD8 principalmente y en menor medida las T CD4 generadas mediaban la citotoxicidad observada. Estos resultados demuestran que el péptido insertado de Omp31 le confiere actividad citotóxica anti-Omp31 a la quimera y que esta actividad citotóxica es mediada principalmente por células T CD8 pero también por células T CD4. Los resultados también demuestran que el agregado del epitope inmunodominante de Omp31 al extremo N-terminal de la BLS mejora significativamente su capacidad protectora. Todo esto la convierte en un inmunógeno potencialmente útil para el desarrollo de una vacuna acelular contra B. ovis y B. melitensis.