Contribución del intercambio de carO mediado por transferencia horizontal de genes y la sobre-expresión de blaOXA-58 inducida por ISAba825 en la evolución de la resistencia a carbapenemes en Acinetobacter baumannii

LIMANSKY AS; MORAN BARRIO J; BRAMBILLA L; PIAZZA A; CAMERANESI MM; VIALE AM

Buenos Aires

Jornada; Jornada Científica de la Academia Nacional de Farmacia y Bioquímica ?Resistencia bacteriana y uso racional de los antibióticos"; 2013

Academia Nacional de Farmacia y Bioquímica

La pérdida del canal de membrana externa CarO en cepas de A. baumannii resistentes a carbapenemes como resultado de la inactivación insercional del gen codificante carO, ha sido reportada recientemente en nuestro laboratorio. En este contexto, caracterizamos dos nuevas secuencias de inserción (IS), ISAba825 e ISAba125. Identificamos asimismo entre las cepas estudiadas la presencia de ISAba825 corriente arriba del gen blaOXA-58 (denominado ISAba825-blaOXA-58), generando un promotor híbrido que estimula significativamente la expresión de blaOXA-58 promoviendo un incremento de los valores de CIM a carbapenemes. Estas observaciones promovieron la evaluación de los eventos genéticos involucrados en la generación de resistencia a carbapenemes en cepas locales epidemiológicamente relacionadas de A. baumannii. Incluimos para ello un grupo de cepas multiresistentes (MR), que mostraron sensibilidad (Ab244) o resistencia a carbapenemes (Ab242 y Ab825). La presencia de blaOXA58, ISAba825, el determinante de resistencia ISAba825-blaOXA-58, y la variante alélica carO fueron evaluadas por PCR y secuenciación; y los perfiles de proteínas de membrana externa mediante SDS-PAGE.Las cepas Ab244, Ab242, y Ab825 exhibieron una elevada relación clonal, según el análisis efectuado empleando diversos métodos genotípicos. En la cepa MR sensible a carbapenemes Ab244 (CIM imipenem: 1µg/ml), que contiene el alelo carO II, no pudo ser identificada la ISAba825 como tampoco blaOXA-58. Por su parte, las cepas MR resistentes a carbapenemes Ab242 y Ab825 (CIM imipenem: 12 µg/ml y 16 µg/ml, respectivamente) mostraron la presencia del determinante de resistencia ISAba825-blaOXA-58 con localización plasmídica. Ambas cepas mostraron ser portadoras del alelo carO III, sin embargo en Ab825 el gen correspondiente a carO se halla interrumpido por la ISAba825 resultando en la pérdida de CarO en la membrana externa de la misma. Los resultados sugieren que Ab242 podría resultar de eventos de recombinación derivados de transferencia horizontal de genes a partir de una cepa relacionada clonalmente con Ab244. Los eventos genéticos seleccionados por presión ambiental incluirían tanto el intercambio alélico de carO como la adquisición de un plásmido portador del arreglo de resistencia ISAba825-blaOXA-58. La selección posterior de cepas con mayores CIM a imipenem (i.e. Ab825), que exhiben adicionalmente el alelo carO III interrumpido por la ISAba825 sugiere que la pérdida total de CarO incrementa aún más la resistencia a carbapenemes. Estos resultados soportan el rol relevante de miembros de la familia CarO en la resistencia a carbapenemes en A. baumannii.