Diagnóstico molecular aplicado a la clasificación de tumores de partes blandas: experiencia en un hospital pediátrico.

COLLI, SANDRA; PRECIADO, MARÍA VICTORIA; MASSONE, CARLA; DE MATTEO ELENA; GARCÍA LOMBARDI, MERCEDES

Congreso; XXXII Congreso Latinoamericano de Patología; 2019

Sociedad Latinoamericana de patología

Diagnóstico molecular aplicado a la clasificación de tumores de partes blandas: experiencia en un hospital pediátrico.AutoresMassone, Carla1,3; Colli, Sandra1; García Lombardi, Mercedes2; De Matteo, Elena1;Preciado, María Victoria1.1Instituto Multidisciplinario de Investigación en Patologías Pediátricas (IMIPP) CONICET-GCBA. División Patología - Hospital de Niños Ricardo Gutiérrez.2 Unidad de Oncología, Hospital de Niños Ricardo Gutiérrez. Gallo 1330 C1425EFD, Buenos Aires, Argentina. 3Instituto Nacional del Cáncer carlamassonehp@gmail.comEspecialidadGenética y biología molecularIntroducciónEl cáncer se caracteriza por la proliferación clonal asociada a rearreglos en genes implicados en diferentes vías de señalización. Se han descriptotranslocaciones cromosómicas específicas en Sarcoma de Ewing(SE) y rabdomiosarcoma alveolar(RMSA) que seaplicana la clasificación molecular, diagnóstico diferencial y/o pronóstico. En pediatría esto permite realizar tratamientos efectivos y específicosque disminuyensecuelas.ObjetivoRealizar la clasificación molecular de casos pediátricos con sospecha diagnóstica de SE y RMSA. Evaluar el impacto de la conservación de las biopsias sobrela integridad de los ácidos nucleicos.Materiales y métodosSe enrolaron pacientes pediátricos con sospecha diagnóstica de SE(n=8)y RMSA (n=4), menores de 18 años; sinradio y/o quimioterapia previa.En 12biopsias de tumor primario [(4conservadas a ?70ºC en el Banco de Tumores del HNRGy 8 fijadas en formol y embebidas en parafina(FFEP)]y2 PAMO se realizó la extracción de ARN con 1) Trizol a partir de muestras congeladas y 2) Recover All Total Nucleic Acid Isolation de muestras FFEP. Se evaluó la translocación por: 1) FISH (fluorescence in situ hybridization) con sondas break apart para los genes EWSR1 en SE y FOXO1 en RMSAy 2) RT-PCR seguido de secuenciación para EWS-FLI1[t(11;22)(q24;q12)]/EWS-ERG[t(21;22)(q22;q12)] en SE y PAX3-FOXO1[t(2;13)(q35;q14)]/PAX7-FOXO1[t(1;13)(p36;q14)] en RMSA. Se utilizó PGK para control de integridad del ARN.ResultadosSe detectó por FISH el rearreglo del gen EWRS1 en 8/8 SE (1/8 positividad en escasas células) y del gen FOXO1 en 3/4 RMSA.La amplificación del gen control por RT-PCR fue positiva en 5/8 FFEP y 6/6 congeladas (4 biopsias y 2 PAMO). En los casos evaluables se detectó por RT-PCR en SE EWS-FLI1 en 6/6 (2 tipo 1; 2 tipo 2; 1 tipo 4 y 1 translocación EWS exón 7/FLI1 exón 4) y EWS-ERG 0/6. En RMSA FOXO1-PAX3 en 1/3 y FOXO1-PAX7 0/3. En 1/3 RMS se confirmó como embrionario y 1/3 presentó discordancia con FISH. En 2/2 SE se confirmó ausencia de infiltración en MO.ConclusionesEl congelado de la biopsia demostró mejor preservación de ARN que la FFEP, esto resalta la importancia del banco de tumores. La secuenciación de los transcriptos permitió la identificación certera de los puntos de ruptura de los genes implicados y la detección de un rearreglo infrecuente (EWS exón 7/FLI1 exón 4). En RMS la concordancia entre las técnicas permitió el diagnóstico de certeza (embrionario vs. RMSA) y su discordancia plantea considerar valores de corte en FISH.